Практикум по аналитической химии. Анализ пищевых продуктов - Кореиман Я.И.
ISBN 5-89448-184-8
Скачать (прямая ссылка):
Для количественной оценки способности разделения веществ в хроматографической системе применяют коэффициент распределения Кр - отношение концентрации вещества в неподвижной и подвижной фазах. Экспериментальное установление коэффициентов распределения в данном методе невозможно, для оценки способности разделения веществ на бумаге применяют коэффициент смещения (подвижности) Rf. Коэффициент смещения равен отношению скорости движения вещества (ив) к скорости движения подвижной фазы ('иПФ)* Экспериментально ве-
личину Rf находят как отношение расстояния X, пройденного веществом, к расстоянию Xf, пройденному растворителем от старта до линии фронта:
Kf =------= —.
^ПФ Xf
Коэффициент Rf изменяется в пределах 0 - 1,00. Величина Rf зависит от природы определяемого вещества, вида хроматографической бумаги, качества и природы растворителя, способа нанесения пробы, техники эксперимента и температуры. Коэффициент Rf не зависит от концентрации определяемого вещества и присутствия других компонентов.
Идентификацию по хроматограмме выполняют следующими способами:
¦ визуальным сравнением характерной окраски зон веществ на исследуемой и стандартной хроматограммах;
¦ измерением коэффициентов подвижности Rf для стандартного и анализируемого вещества в определенном растворителе. Хроматографирование и установление Rf для исследуемой и стандартной смесей проводят на одинаковой бумаге и в одной камере в строго идентичных условиях. Сопоставляя коэффициенты Rf, делают заключение о присутствии в анализируемой смеси тех или иных компонентов.
Количественное определение выполняют непосредственно по хроматограмме или при вымывании (элюировании) анализируемого вещества с бумаги.
Способы количественного анализа:
¦ визуальное сравнение интенсивности окраски пятен на исследуемой и стандартной хроматограммах (полуколичествен-ное определение, точность 15 -20 %);
¦ измерение площади пятна, образованного данным компонентом, и нахождение концентрации вещества по градуировочному графику, построенному для серии стандартных растворов в координатах: площадь пятна - концентрация вещества; точность определения 5 -10 %;
¦ элюирование определяемого вещества с поверхности хроматограммы и спектрофотометрическое или флуориметриче-
363
ское измерение оптической плотности элюата (А); концентрацию вещества в растворе рассчитывают по формуле:
c-K-S-A,
где К ~ коэффициент пропорциональности; S - площадь пятна, измеренная предварительно, мм2; точность определения 1 %.
По способу хроматографирования различают восходящую, нисходящую, круговую, градиентную и двухмерную хроматографии.
Метод хроматографии на бумаге широко применяется для определения неорганических соединений, аминокислот, аминов, белков, углеводов, жирных кислот, фенолов, витаминов в химической, пищевой, фармацевтической промышленности, медицине, биохимии.
Метод нашел применение в анализе практически всех пищевых продуктов: в сахарном производстве - для определения углеводов; в хлебопекарном и кондитерском - аминокислот, органических кислот, углеводов, полисахаридов и карбонильных соединений; в виноделии - органических кислот и аминокислот; в производстве молока и молочных продуктов - аминокислот,; в мясоперерабатывающей промышленности - фенолов, жирных и летучих кислот, аминокислот и карбонильных соединений. Анализ пищевых продуктов достаточно трудоемок, включает сложную пробоподготовку, поэтому в данном пособии приведены лабораторные работы, реально выполнимые в течение одного занятия и позволяющие освоить приемы хроматографирования на бумаге.
Лабораторная работа № 78 КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ СМЕСИ КАТИОНОВ
Смесь нескольких катионов разделяют методом одномерной хроматографии на бумаге. Подбирают подходящую подвижную фазу, для проявления - соответствующий проявитель. По окраске каждой зоны, полученной после хроматографирования и проявления, устанавливают качественный состав смеси катиоиов.
Цель работы: научиться разделять и идентифицировать катионы методом круговой бумажной хроматографии.
Гидрофильная хроматографическая бумага или обеззоленные фильтры, синяя или красная лента.
Ножницы.
Растворитель - смесь ацетона, концентрированной НС1 и воды в объемном соотношении 87 : 8 : 5.
Проявители - спиртовой раствор рубеановодородной кислоты с массовой долей ОД %; аммиачный раствор диме-тилглиоксима с массовой долей 1,0 %; водный раствор гексацианоферрата (II) калия с концентрацией
1,0 моль/дм3.
Концентрированный раствор аммиака.
Стандартная смесь хлоридов Fe3+, Cu2+, Со2+, Ni2+, содержащая по 2,0 мг соответствующего металла в 1 см3.
© Работу следует выполнять в вытяжном шкафу при включенной вентиляции!
Подготовка хроматографы ческой бумаги. Готовят два круга хроматографической бумаги, диаметр которых на 0,2 см больше диаметра чашки Петри. Отмечают карандашом центр круга и вырезают "фитиль" шириной 0,5 см и длиной 1 - 1,5 см (рис. 48).
