Практикум по аналитической химии. Анализ пищевых продуктов - Кореиман Я.И.
ISBN 5-89448-184-8
Скачать (прямая ссылка):
Порядок выполнения работы
й Работу следует выполнять в вытяжном шкафу при включенной вентиляции!
Подготовка хроматографической бумаги. Готовят два круга бумаги с диаметром на 0,2 см большим диаметра чашки Петри.
Для удаления следов катионов металлов бумагу обрабатывают раствором комплексона III. Для этого бумагу помещают в
368
раствор комплексона III на 1-2 мин, затем тщательно промывают дистиллированной водой, так как комплексон III мешает определению аминокислот, и сушат на воздухе.
Если бумага химически чистая и не содержит ионов тяжелых металлов, предварительная обработка не требуется.
Карандашом отмечают центр круга и вырезают "фитиль" шириной 0,5 см и длиной 1 - 1,5 см (см. рис. 48).
Хроматографирование. В две чашки Петри помещают растворитель на 1/2 высоты. В центр одного хроматографического круга микропипеткой наносят каплю стандартной смеси аминокислот, в центр другого - каплю анализируемой смеси. Каждую хроматограмму помещают в чашку Петри так, чтобы "фитили" погружались в растворитель (см. рис. 49). Чашки закрывают крышками и разделяют смесь до тех пор, пока растворитель под действием капиллярных сил пройдет почти до конца хроматографической бумаги. На полученных хроматограммах карандашом отмечают фронт растворителя.
Хроматограммы сушат на воздухе и опрыскивают из пульверизатора раствором проявителя. Для четкого проявления концентрических колец хроматограммы помещают в сушильный шкаф (60-65 °С) на 5 мин.
Аминокислоты на хроматограмме располагаются в определенной последовательности: лизин, аргинин, аспарагиновая кислота, аланин. В местах расположения аминокислот появляются концентрические сине-фиолетовые кольца (табл. 30).
Таблица 30
Качественные характеристики простейших аминокислот
Аминокислота Порядок Окраска зоны Rf
расположения
Лизин 1 Красно-фиолетовая 0,13
Аргинин 2 Фиолетово-красная 0,17
Аспарагино
вая кислота 3 Фиолетово-синяя 0,23
Аланин 4 Фиолетовая 0,52
Идентификация. Качественный состав смеси аминокислот в анализируемом растворе устанавливают одним из следующих способов:
¦ сопоставляют положение окрашенных колец на стандартной и исследуемой хроматограммах;
¦ рассчитывают коэффициенты Rf аминокислот по исследуемой и стандартной хроматограммам и сопоставляют их; результаты заносят в таблицу.
Аминокислота Хроматограмма
стандартная исследуемая
X Xf Rf X Хг Rf
¦ сравнивают рассчитанные коэффициеты Rf аминокислот со справочными данными (см. табл. 30).
© Растворитель из чашек Петри после хроматографирования
необходимо слить в склянку и хранить в вытяжном шкафу.
Лабораторная работа № 80 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОТ В ТЕСТЕ И ХЛЕБЕ
Технология хлебопечения предусматривает биохимическое получение кислого теста. Тесто и мякиш хлеба содержат молочную, яблочную, винную, лимонную, щавелевую, янтарную и другие органические кислоты. При приготовлении теста и для оценки качества готовой продукции определяют содержание нелетучих органических кислот. Недостаток или избыток кислот отрицатель влияют на вкусовые качества хлеба.
Определение заключается в предварительном выделении органических кислот в свободном виде методом ионообменной хроматографии и последующем анализе элюата методом восходящей хроматографии на бумаге.
Цель работы: овладеть приемами пробоподготовки и определить содержание органических кислот в тесте или хлебе методом восходящей хроматографии на бумаге.
Хроматографическая камера для восходящей хроматографии. Технические весы 3-го класса точности.
Хроматографическая колонка, заполненная катионитом КУ-2. Хроматографическая колонка, заполненная анионитом АВ-17. Вибросмеситель.
Центрифуга с центрифужными пробирками.
Водяная баня.
Пульверизатор.
Гидрофильная хроматографическая бумага.
Микропипетка вместимостью 0,1 см3.
Мерная пипетка вместимостью 50 см3.
Мерная колба вместимостью 200 см3.
Мерные цилиндры вместимостью 50 и 250 см3 - по 1 шт. Химические стаканы вместимостью 100 см3 - 2 шт. Фарфоровая чашка с пестиком.
Ножницы.
Раствор хлористоводородной кислоты с концентрацией
2,0 моль/дм3.
Раствор гидроксида натрия с концентрацией 1,0 моль/дм3. Растворитель - смесь н.бутилового спирта, муравьиной кислоты и воды в объемном соотношении 10:2:5.
Проявитель - спиртовой раствор бромфенолового синего с массовой долей 0,05 %.
Стандартные растворы молочной, яблочной, лимонной, щавелевой и винной кислот с массовой долей 1,0 %. Универсальная индикаторная бумага.
Порядок выполнения работы
^ Хроматографирование следует выполнять в вытяжном шкафу при включенной вентиляции!
Подготовка хроматографических колонок. Колонку, заполненную анионитом АВ-17, предварительно переводят в активную ОН-форму, пропуская через нее 20-30 см3 раствора гид-
