Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Кореиман Я.И. -> "Практикум по аналитической химии. Анализ пищевых продуктов " -> 110

Практикум по аналитической химии. Анализ пищевых продуктов - Кореиман Я.И.

Кореиман Я.И. Практикум по аналитической химии. Анализ пищевых продуктов — Воронеж, 2002. — 408 c.
ISBN 5-89448-184-8
Скачать (прямая ссылка): praktikumpoanalithim2002.djvu
Предыдущая << 1 .. 104 105 106 107 108 109 < 110 > 111 112 113 114 115 116 .. 119 >> Следующая

Кюветы с толщиной слоя 1 см.
Хроматографическая колонка, заполненная катионитом КУ-2.
Вибросмеситель.
Кристаллизатор.
Водяная баня.
Пульверизатор.
Ножницы.
Гидрофильная хроматографическая бумага.
Микропипетка вместимостью 0,1 см3.
Мерные пипетки вместимостью 5 и 10 см3 - по 1 шт.
Мерные цилиндры вместимостью 10, 50 и 250 см3 - по 1 шт.
Химические стаканы вместимостью 100 см3 - 2 шт.
Пробирки с пробками - 10 шт.
Покровное стекло.
Раствор хлористоводородной кислоты с концентрацией
2.0 моль/дм3.
Раствор аммиака с концентрацией 2,0 моль/дм3.
Растворитель - смесь н.бутилового спирта, ледяной уксусной кислоты и воды в объемном соотношении 4:1:1.
Раствор 8-гидроксихкнолина с массовой долей 0,2 %.
Проявитель - раствор нингидрина в ацетоне с массовой долей 0,5 %.
Раствор сульфата меди в этиловом спирте с массовой долей
75.0 %.
Этиловый спирт с массовой долей 75,0 %.
Раствор метилового оранжевого с массовой долей 0,1 %.
Стандартные растворы аминокислот с концентрацией
10.000 мг/см3.
Порядок выполнения работы
*?? Хроматографирование следует выполнять в вытяжном шкафу при включенной вентиляции!
Подготовка хроматографической колонки. Колонку, заполненную катионитом КУ-2, готовят к работе, пропуская 20 -30 см3 раствора НС1 со скоростью 1-2 капли/мин. Катионообмен-ник тщательно промывают дистиллированной водой (200-300 см3) до нейтральной реакции по метиловому оранжевому (пробную реакцию проводят на покровном стекле). Подготовленная колонка применяется для перевода кислых и нейтральных солей в свободные кислоты.
Подготовка хроматографы ческой бумаги. Вырезают полоски бумаги длиной 40 см, ширина зависит от размера хроматографической камеры. В кристаллизатор наливают слой раствора 8-гидроксихинолина, полоски бумаги пропускают через раствор и затем сушат на воздухе.
На расстоянии 4 см от нижнего края бумаги карандашом проводят стартовую линию. В 2 см от левого края отмечают первую точку, расстояние между точками нанесения пробы на хроматограмму должно составлять 3 см.
^ Следует помнить, что при выполнении работ с хроматографической бумагой, начиная с ее разметки и заканчивая проявлением, нельзя прикасаться к бумаге руками, так как на них всегда есть следы аминокислот. Бумагу необходимо брать только за край, противоположный стартовой линии, или боковые края.
Пробоподготовка. Анализируемое вино (10,00 см3) помещают в колонку с катионитом и пропускают со скоростью 1 см3/мин. Элюат собирают в химический стакан. После сорбции аминокислот катионит промывают 100 см3 дистиллированной воды и элюируют аминокислоты 100 см3 раствора аммиака. Элюат выпаривают на водяной бане до полного удаления аммиака, раствор упаривают до 1-2 см3.
Хроматографическое разделение аминокислот. Концентрированный элюат (30,00-50,00 мм3) микропипеткой наносят на линию старта хроматографической бумаги. Бумагу подсушивают на воздухе и помещают в камеру для нисходящей хроматографии (рис. 51). Проводят хроматографирование с 2-3-кратным пропусканием растворителя.
После разделения проявляют аминокислоты раствором нии-гидрина. В кристаллизатор тонким слоем наливают раствор проявителя, бумагу погружают в проявитель на 10 мин при 70 °С. Сушат хроматограмму на воздухе 3-5 мин и в сушильном шкафу 15 мин при 60-70 °С. Аминокислоты закрепляют спиртовым раствором сульфата меди, опрыскивая хроматограмму из пульве-
ризатора. После высушивания бумаги пятна аминокислот становятся алыми.
Рис. 51. Хроматографическая камера для нисходящей хроматографии: 1 - растворитель; 2 - перекладина для бумаги; 3 -полоска бумаги; 4 - стеклянный сосуд; 5 - стекающий растворитель
Идентификация. Получают относительно устойчивую хроматограмму. По ней ‘ идентифицируют аминокислоты, рассчитывая коэффициенты Rf и сравнивая их с данными, приведенными в табл. 31.
Т аблица 31
Коэффициенты подвижности аминокислот, разделенных смесью н. бутилового спирта, уксусной кислоты и воды
Аминокислота Rf Аминокислота Rf
Цистин 0,08 Треонин 0,44
Лизин 0,13 Аланин 0,52
Г истидин 0,15 Пролин 0,57
Аргинин 0,17 Тирозин 0,59
Аспарагиновая кислота 0,23 Метионин 0,74
Серии 0,27 Валин 0,78
Глицин 0,31 Фенилаланин 0,81
Глютаминовая кислота 0,38 Лейцин 0,87
Количественный анализ. Готовят серии стандартных растворов идентифицированных компонентов с концентрацией 2,50 -10,00 мг/см3. Аминокислоты (2,50 - 10,00 мм3) микропипеткой наносят на полоски бумаги, расстояние между каплями 3 см. Последовательно проводят весь цикл хроматографирования.
Пятна аминокислот на исследуемой хроматограмме аккуратно вырезают, каждое отдельно измельчают и помещают в пробирку с пробкой. Для элюирования аминокислот в каждую пробирку добавляют по 5,00 см3 этилового спирта. Одновременно готовят растворы сравнения, помещая в пробирки чистые участки исследуемой хроматограммы, вырезанные с боковых сторон хроматограммы и равные по площади пятнам аминокислот, и добавляя такой же объем этилового спирта. Пробирки помещают на вибросмеситель и экстрагируют 40 мин (желательно в затемненном месте), при этом раствор приобретает алую окраску.
Предыдущая << 1 .. 104 105 106 107 108 109 < 110 > 111 112 113 114 115 116 .. 119 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed