Методы анализа молока и молочных продуктов - Инихов Г.С.
Скачать (прямая ссылка):
Молочный жир омыляют по общепринятой методике. В жаростойкую колбу емкостью 300 мл отвешивают 1 г профильтрованного молочного жира. К навеске добавляют 0,4 мл 50%-ного водного раствора едкого натра и 5 мл глицерина. Смесь осторожно нагревают до кипения при взбалтывании до тех пор, пока содержимое колбы не станет прозрачным. Ее охлаждают до 80—WC и приливают 20 мл свежепрокипяченной воды той же температуры. При неполном растворении мыла колбу нагревают на водяной бане. В нее помещают кусочки пемзы и подсоединяют к аппарату для перегонки (рис. 74).
7—2983
193
В колбу с раствором мыла через воронку вливают 10 мл 2,5%-ного раствора H2SO4. Сначала нагревается парообразователь, затем колба. Процесс кипения в них регулируют так, чтобы уровень жидкости в колбе сохранялся во время отгонки постоянным. Дистиллят с летучими кислотами собирают в колбу емкостью 1 л. Когда объем его составит 500—550 мл, следующие 50 мл собирают в цилиндр, фильтруют и оттитровывают 0,1 н. раствором NaOH. Считают, что летучие кислоты отогнаны, когда на 50 мл дистиллята при титровании расходуется до 0,2 мл 0,1 н. NaOH (в дистиллят может перейти небольшое количество высокомолекулярных кислот).
Рис. 74. Схема аппарата для отгонки летучих жирных кислот:
/ — парообразователь; 2 — воронка; 3 — холодильник; 4 — колба с жиром; 5 — колба для сбора дистиллята.
Полученный дистиллят фильтруют. В фильтрате — летучие растворимые в воде кислоты, а нерастворимые задерживаются на фильтре, стенках холодильника и других частях аппарата. Для сбора их от аппарата отсоединяют парообразователь и перегонную' колбу, а к холодильнику присоединяют колбу с этиловым спиртом, которую нагревают на водяной бане. Спирт перегоняют до нейтральной реакции конденсата по фенолфталеину.
Всю посуду, соприкасающуюся с дистиллятом (колбу, цилиндр и др.), промывают этиловым спиртом, который
194
сливают вместе со спиртовым конденсатом. Водный (№ I) и спиртовой (№ 2) растворы летучих кислот отдельно оттитровывают 0,1 и. раствором NaOH. Водный раствор выпаривают примерно до объема 30—40 мл в сушильном шкафу при 1000C и охлаждают до 14—16° С. Оба раствора смешивают и общее количество раствора летучих кислот (№ 3) доводят до 100 мл. Раствор № 3 используют для хроматографического разделения кислот. Его можно хранить 5—7 дней при температуре 18—200C в склянке с притертой пробкой.
Разделение летучих кислот. В фарфоровую ступку отвешивают 2 г силикагеля, вливают 1 г буферного раствора (К2НРО4+К3РО4, pH 6,5) и все тщательно растирают. Добавляют 0,75 мл воды и снова хорошо растирают. Хороший адсорбент должен быть по виду сухим. В ступку добавляют хлороформ для получения густой кашицы, которую через воронку переносят в укрепленную в штативе колонку, куда добавляют 20—25 мл хлороформа, пропуская его 40 —50 мин, чтобы за это время он свободно вытекал из колонки (40—50 капель за I мин).
Столбик силикагеля в хроматографической колонке всегда должен быть покрыт хлороформом. Когда адсорбент уплотнится, стеклянной палочкой выравнивают его поверхность, и колонка готова для использования.
На хроматографической колонке кислоты адсорбируются в зависимости от их молекулярной массы. Высота местоположения обратно пропорциональна молекулярной массе. Берут 3 мл раствора № 3 жирных кислот в стаканчик емкостью 50 мл и выпаривают в сушильном шкафу при 100° С. Остаток растворяют 5—7 каплями 50%-ного раствора H2SO4 и приливают 2—3 мл хлороформа. При этом свободные кислоты переходят в хлороформ. В смесь для удаления следов влаги вносят 0,2 г безводного сернокислого натрия. Хлороформ с растворенными в нем кислотами сливают в небольшой цилиндр. Летучие кислоты еще 2—3 раза промывают хлороформом так, чтобы общий объем жидкости не превышал 5—7 мл.
Полученный раствор кислот переносят в колонку с силикагелем, приготовленную непосредственно перед опытом. Кран колонки закрыт. Когда раствор кислот войдет полностью в столбик силикагеля, в колонку вливают 10—15 мл хлороформа (по мере вытекания хлороформа его добавляют, наблюдая, чтобы силикагель все
7*
195
время был покрыт хлороформом). Открывают кран в колонке. Вытекающий из колонки раствор (элюат) собирают в цилиндры емкостью по 5 мл и титруют из микробюретки 0,02—0,04 н. раствором NaOH в этиловом спирте с индикатором фенолфталеином.
Каждая кислота выделяется в нескольких порциях элюатов (3—6). Наряду с этим получаются элюаты и без кислот, они показывают границы разделения отдельных кислот. После заливки в колонку хлороформа из нее вытесняются сначала каприловая, а затем капроновая кислоты (табл. 26).
Таблица 26
Количество кислот
Номер Вытеснитель Количество 0,02—0,04 н. Наличие кислот 3 мл отгона в иавескс жира 2,5 г
NaOH1 мл мл мг мг 1
1 2-5 6 7—10 11 12—13 14—19 Хлороформ 20%-ныи раствор бутилового спирта в хлороформе То же 0 0,08; 0,1; 0,03; 0,03 0 0,05; 0,08;0.07; 0,02 0 0 0,04; 0,06; 0,12 0,09; 0,06; 0,03 Нет Ka прило-вая Нет Ka проио-вая Нет Нет Масляная 0,21 0,25 0,40 0,353 0,420 0,672 23,51 27,97 51,4 3,5 3,0 4,2
20 0 Нет — — — —
Когда в элюатах прекращается выделение капроновой кислоты, в колонку наливают 20%-ный раствор п-бутилового спирта в хлороформе для вытеснения масляной кислоты. После выделения всей масляной кислоты работу на колонке прекращают. Для выполнения этого анализа требуется около 2 ч. При хроматографировании на такой же колонке смеси растворов чистых кислот после масляной кислоты выделяется уксусная. В растворах кислот, полученных из молочного жира, уксусная кисло-
