Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Физика -> Инихов Г.С. -> "Методы анализа молока и молочных продуктов" -> 59

Методы анализа молока и молочных продуктов - Инихов Г.С.

Инихов Г.С., Брио Н.П Методы анализа молока и молочных продуктов — М.: Пищевая промышленность, 1971. — 423 c.
Скачать (прямая ссылка): metodianalizamoloka1971.djvu
Предыдущая << 1 .. 53 54 55 56 57 58 < 59 > 60 61 62 63 64 65 .. 146 >> Следующая

Аспарапшовая кислота 0,23 0,74
Серии......... 0,27 Валин ........ 0,78
Глицин ........ 0,31 Феннлаланин ..... 0,81
Глютаминовая кислота 0,38 Лейцин+изолейцип . . 0,87
всей длине листа. Камеру плотно закрывают крышкой, наблюдая прохождение раствора на полосе бумаги.
Вещества в растворе передвигаются с разной скоростью, поэтому разделяются. Когда растворитель дойдет до конца бумаги, отдельные вещества будут находиться на определенных местах соответственно скорости продвижения. Чтобы обнаружить эти адсорбировавшиеся на бумаге вещества, хроматографическую бумагу снимают, подсушивают и обрабатывают специальными реактивами, которые с исследуемыми веществами дают окрашенные соединения. При определении аминокислот обычно применяют 0,5% -ный раствор нипгидрина в ацетоне (реактив 109) или изатина. Бумагу 5 мин выдерживают в сушильном шкафу при 60- 65° С и в местах расположения аминокислот появляются пятна сине-фиолетовые от нингидрина (только пролин дает желтое пятно) и от красной до синей окраски — от изатина (табл. 24).
При взаимодействии с нингидрином аминокислоты окисляются и распадаются с образованием аммиака, альдегида и углекислоты. Нингидрин восстанавливается и конденсируется с другой частицей нингидрина и аммиаком. В результате образуется сложное соединение муре-ксидного строения, окрашенное в синий цвет.
Нингидрин окрашивает только пролин в желтый цвет, а остальные аминокислоты — в фиолетово-синий цвет, поэтому для идентификации аминокислот применяют также изатин. Чувствительность изатиновой реакции к аминокислотам меньше, чем нингидриновой, поэтому на бумагу исследуемого раствора при использовании изатина наносят в 1,5—2 раза больше. Проявление хро-
182
Таблица 24
Аминокислоты и пептиды Порядок расположения Окраска пятен при проявлении изатином с последующим отбеливанием силикатным клеем (по А. Бояркину)
Глютатиоп 1 Фиолетово-красная
2 Серо-фиолетово-краспая
Лизин ..... 3 От красной до фиолетово-
красной
4 От серо-фнолетовон до серо-
зеленой
Аргинин 5 Фиолетово-красная
Аспарагин С От фиолетовой до синей
Аспарагиновая кислота 7 От фиолетовой до сине-фно-
летовой
8 Красно-фиолетовая
Серпн . . . 9 Красно-коричневая
Глицин • ... 10 Красная
Оксипролин 11 Синяя (исчезающая)
Глюгаминовйі) кислота . . 12 Dt красно-фиолетовой до
13 фиолетовой
Желто-кор нчневая
14 От фиолетовой до фиолето-
bo-ciiiich
15 Синяя (исчезающая)
Am и ном асля ная кпс'шта . . 10 Or фиолетовой до фполе го-
no-синей
Тирозин ..... 17 Or серо-синей до сине-зеле-
ной
18 От ссро-фнолетовон до си-
не-фиолетовой
19 От фиолетовой до сине-фио-
летовой
20 Красная
Феннлалаиин . 21 От фиолетовой до синей
22 От красной до фнолегово-
красиой
матограмм ведут, опрыскивая полосы бумаги 1%-ным раствором изатина (реактив 75).
После опрыскивания хроматограмму сушат несколько минут при комнатной температуре и 15 мин в термостате при 60—75° С. Для устранения красно-желтого фона и стабилизации пятен хроматограмму обрабатывают теплой смесью из 40 мл конторского клея и 10 мл 20%-ного раствора углекислого натрия, после чего высушивают на воздухе и парафинируют. Получается разноцветная, хорошо идентифицированная хроматограмма (А. Бо-яркин).
183
При количественном определении аминокислот просушенную хроматограмму после обработки нингидрином смачивают раствором азотнокислой меди (реактив 117). Бумагу высушивают, пятна становятся алыми. Выделившиеся аминокислоты идентифицируют по Rf или стандартными растворами аминокислот.
Пятна на бумаге аккуратно вырезают ножницами, каждое отдельно измельчают, помещают в пробирки (с указанием аминокислоты), которые закрывают пробками. В каждую пробирку вносят по 10 мл 85%-ного раствора этилового спирта. Вырезают участки чистой бумаги, равные по площади пятнам аминокислот, для холостых проб. Пробирки выдерживают в темноте 2 ч, часто встряхивая. Спиртовой экстракт сливают в кюветы на 20 мл и колориметрируют на фотоэлектроколориметре ФЭК-М при длине волны 530 нм с зеленым светофильтром, сопоставляя полученные числа с такими же экстрактами холостых проб. Количество аминокислот определяют по калибровочному графику, построенному по чистым аминокислотам.
Аминокислоты1 (2,5-12,5 мкг) наносят на бумагу и последовательно проводят весь цикл хроматографическо-го анализа. Некоторую особенность представляет определение глютаминовой кислоты в связи с высоким содержанием ее в белках молока. В пятне на хроматограмме содержится около 30 мкг этой аминокислоты, поэтому для экстракции ее берут 30 мл метилового спирта.
Показания фотометрироваїіия стандартных растворов некоторых аминокислот приведены в табл. 25. По этим данным вычерчивают кривые, по которым рассчитывают количество аминокислот в белках молока.
Количество аминокислот в белках молока рассчитывают по формуле
X = -^7--100%, gV\
где gi — количество аминокислоты в пятне, найденное по графику, мкг; V — общий объем раствора, мл; g — навеска абсолютно сухого белка, мкг; Vi — объем раствора, нанесенного на бумагу, мл.
Предыдущая << 1 .. 53 54 55 56 57 58 < 59 > 60 61 62 63 64 65 .. 146 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed