Методы анализа молока и молочных продуктов - Инихов Г.С.
Скачать (прямая ссылка):
Одновременно готовят колонку из силикагеля. В суженный конец стеклянной трубки диаметром 8 мм и длиной 40—50 см вставляют маленькую ватную пробку. Трубку закрепляют в штативе и под нее подставляют пустую сухую колбочку. В фарфоровую ступку отвешивают 3 г подготовленного порошка силикагеля, смешивая с 20 мл 1%-ного раствора /г-бутанола в хлороформе (растворитель I), все тщательно размешивают, но не растирают, чтобы не размолоть силикагель (реактив 54), и через воронку заливают в стеклянную трубку.
Ступку обмывают 10 мл растворителя, который затем выливают в трубку. Растворитель просачивается че-
ISS
рез слой силикагеля в подставленную колбочку, а порошок силикагеля уплотняется. Когда уровень растворителя станет приближаться к слою силикагеля, в трубку из подставленной колбочки заливают растворитель для максимального уплотнения колонки силикагеля. Необходимо внимательно следить за уровнем растворителя, чтобы не допустить стекания всего растворителя, так как при обсушивании колонка трескается и становится непригодной для разделения кислот. Для уплотнения колонки достаточно пропустить растворитель 2 раза.
В подготовленную колонку осторожно наливают раствор летучих кислот, а под колонку подставляют мерник с сифоном на 2 мл растворителя. Верхний конец трубки присоединяют к воздушному нагнетательному насосу, чтобы повысить давление и ускорить прохождение растворителя через колонку. Когда весь раствор войдет в колонку, заполняют трубку новой порцией растворителя.
Проникая в колонку, кислоты адсорбируются на си-ликагеле. Степень адсорбции различных кислот неодинакова, высокомолекулярные кислоты (валерьяновая, капроновая и т. д.) адсорбируются слабо и вымываются из колонки первыми порциями растворителя, поэтому титровать отмеренные сифоном порции растворителя следует сразу, как только раствор кислот будет помещен в колонку. При вхождении кислот в колонку цвет верхней части колонки переходит из синего в желтый, а затем при разделении кислот появляются слои зеленого цвета различных оттенков. Для титрования используют 0,02 н. раствор едкого натра в воде или в метиловом спирте с индикатором фенолфталеином. Результаты титрования каждой порции записывают в определенной последовательности.
Растворителем I вымываются валерьяновая и более высокомолекулярные кислоты. Для вымывания пропио-новой и масляной кислот требуется 10%-ный раствор бутанола в хлороформе (растворитель II), уксусной кислоты— 30%-ный раствор бутанола (растворитель III), муравьиной кислоты — 50%-ный раствор бутанола в хлороформе (растворитель IV).
Валерьяновая и более высокомолекулярные кислоты на колонке не разделяются и в результате титрования дают суммарную цифру, образуя на графике одну общую
200
вершину при титровании первых порций растворителя. После вымывания высокомолекулярных кислот вытекающий из колонки растворитель не содержит кислот, и на графике отмечается крутое падение кривой. С этого момента используют растворитель II, который вымывает масляную и затем пропионовую кислоту, на графике образуются две рядом стоящие вершины.
После них проходит через колонку с растворителем III уксусная кислота, а затем растворителем IV вымывается муравьиная. При наличии всех указанных летучих кислот на графике отмечается пять вершин, соответствующих различным кислотам. На один анализ расходуется 150—200 мл растворителей, что составляет 75—100 порций, подвергающихся титрованию. Количество каждой кислоты определяют по сумме израсходованного раствора едкого натра.
Нелетучие кислоты. Для определения нелетучих органических кислот используют подкисленную серной кислотой сырную массу после отгона летучих кислот. Растворимую часть сырной суспензии отделяют фильтрованием, выпаривают па водяной бане до объема в 40 мл и заливают в специальные стаканы для экстрагирования из жидкости в аппарате Сокслета. Таким образом экстрагируют 50 ч из водного раствора растворимые в эфире вещества. Эфир отгоняют, а сухой остаток растворяют в 0,5 мл воды, а затем используют для хроматографии.
40 мкл экстракта наносят на бумагу, предварительно промытую растворителем (водонасыщенный раствор бу-танола, подкисленный муравьиной кислотой — 5 мл на 100 мл бутанола). Пятно экстракта подсушивают и хро-матографируют в высоких камерах при температуре 18—20° С в течение трех суток, для чего берут длинные листы бумаги (75 см).
Бумагу высушивают при температуре 18—20° С и проветривают для удаления муравьиной кислоты сутки в вытяжном шкафу. Хроматограмму проявляют водным раствором бромкрезола (40 мг на 100 мл воды), опрыскивая ее из пульверизатора. Пятна кислот окрашиваются в желтый цвет, а фон — в синий. Хроматографированием обнаруживают молочную кислоту и идентифицируют по свидетелям янтарную, фумаровую, щавелевую и в большинстве сыров — гликолевую.
201
ОСАДОЧНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
В осадочной хроматографии основным фактором, определяющим разделение и выделение веществ из раствора смеси компонентов, является процесс образования осадков, отличающихся различной растворимостью. При образовании хроматограмм нескольких осадков расположение зон в колонке зависит от отношения произведений активности соответствующих осадков. В верхней части колонки выделяются осадки веществ, менее растворимых, в нижней части — более растворимых. Смесь колонки состоит из носителя — 'высокодисперсного вещества (безводная окись алюминия)' и осадителя ¦— вещества, образующего с исследуемым ионом характерно окрашенное труднорастворимое соединение.
