Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка):
I И +CH2OH(CHOH)4C _> IM +CH2OH(CHOH)4COOH
W / глюкоза W / глюкуроновая
NO2 H NO2 кислота
пикриновая кислота пикраминовая
кислота
окраска желтая окраска красная
Таким методом можно определять глюкозу, фруктозу, маннозу, галактозу, ксилозу, арабинозу. Дисахариды - сахароза, целлобиоза, лактоза, мальтоза - определяют после кислотного гидролиза; определение крахмала и некоторых других полисахаридов можно проводить после слабого кислотного гидролиза.
419
Ход работы
Для экстракции растворимых углеводов берут навеску воздушно-сухого растительного материала массой 0,1 - 0,5 ± 0,0001 г. Переносят в стакан емкостью 100 см" И заливают 50 CMj дистиллированной воды. Содержимое стакана тщательно перемешивают стеклянной палочкой и ставят на водяную баню. Если материал не содержит крахмала, то экстракцию углеводов ведут в течение 30 мин при 70°С. При наличии крахмала (зерно, клубни) экстракцию ведут при 40 - 500C в течение 1 ч.
После экстракции углеводов проводят в растворе осаждение белков. Полного осаждения белков для определения углеводов не требуется, но необходимо, чтобы раствор не содержал опалесцирующих компонентов. Для этого при анализе зерна и зеленых частей растений в стакан с экстрактом углеводов приливают 0,7 см3 10%-го уксуснокислого свинца, при анализе корнеклубнеплодов - 0,3-0,4 CMj 10%-ГО уксуснокислого свинца, тщательно перемешивают и оставляют на 20 мин для созревания осадка.
Фильтруют раствор через сухой фильтр средней плотности в мерную колбу на 100 см\ можно фильтровать в колбы на 200 CMj, если ожидается высокое содержание углеводов.
Определение моносахаридов
Ход анализа
В сухие химические пробирки емкостью 20 - 40 CMj берут микропипеткой 1-3 см" фильтрата, содержащего от 0,2 до 0,3 мг редуцирующих Сахаров. Если количество фильтрата менее 3 см", то до этого объема доводят дистиллированной водой.
В пробирку прилить 3 см" пикриновой кислоты и 3 CMj 20%-го раствора соды (соотношение компонентов 1:1:1), закрыть пробкой, тщательно перемешать.
Открывают пробку и ставят пробирку на кипящую водяную баню на 30 мин. Уровень воды должен быть не ниже 2/3 высоты объема смеси в пробирках. Для установки пробирок на баню используют пластмассовый или металлический штатив.
Через 30 мин пробирки вынимают и охлаждают. Затем содержимое пробирок через воронку без фильтра переносят в мерные колбы на 50 см", ополаскивая несколько раз пробирки дистиллированной водой. Содержимое колбочек доводят до метки дистиллированной водой, раствор перемешивают и колориметрируют при 490 нм.
Холостое определение проводят одновременно. В стакан на 100 см" приливают 50 см" дистиллированной воды, добавляют в него 0,7 см" уксуснокислого свинца.
Содержимое стакана переносят в мерную колбу на 100 см", доводят до метки. Из колбы берут 3 CMj раствора в пробирку, прибавляют 3 CMJ
420
пикриновой кислоты и 3 см1 20%-го раствора соды, перемешивают, выдерживают 30 мин в кипящей водяной бане. Охлаждают и переносят в мерную колбу на 50 см"\
Раствор, полученный таким образом, используют как раствор сравнения при колориметрировании.
Расчет
С-Р-100
Содержание моносахаридов [%]
H -1000 ,
где С - количество глюкозы по графику, мг; P - разведение (100/3); H - навеска воздушно-сухого материала, г.
Определение суммы Сахаров
Ход анализа
В сухие пробирки микропипеткой берут по 1 CMj фильтрата и прибавляют 0,5 см" 10%-го раствора HCl. Ставят штативы в кипящую водяную баню на 5 мин. для гидролиза дисахаров.
После гидролиза содержимое пробирок охлаждают, прибавляют 0,5 CMj 20%-го раствора соды для нейтрализации соляной кислоты. Добавляют в пробирку 3 CMj пикриновой кислоты, перемешивают, приливают 3 см" 20%-го раствора соды, тщательно перемешивают.
Ставят пробирку в кипящую водяную баню на 30 мин., охлаждают. Через воронку без фильтра переносят в мерную колбу на 50 см". Проводят колориметрическое определение моносахаридов.
Сумма Сахаров рассчитывается по формуле приведенной выше.
Количество дисахаров определяется по разнице:
дисахара % - (% Сахаров - % моносахаров) 0,95
(0,95 - коэффициент пересчета глюкозы в дисахара).
Приготовление шкалы стандартных растворов
1 г просушенной в течение 2 ч при температуре 60-700C глюкозы растворяем в 1 дм" дистиллированной воды. Для построения графика набирают в пробирки 0.2: 0.4: 0.6: 0.8: 1.0: 1.2: 1.4; 1.6: 1.8: 2.0: 2.2; 2.4: 2.6 см3 стандартного раствора, доводят до 3 см" водой и далее поступают так же. как и в случае определения моносахаридов. При построении графика и при определении углеводов сравнение вед\т по раствору, содержащем}' все реактивы, прибавляемые к 3 см" воды.
Реактивы
1. Насыщенный раствор пикриновой кислоты: 20 - 30 г пикриновой кислоты заливают примерно 500 см" воды. Тщательно перемешивают в течение 5-10 мин. Для работы из этого объема отфильтровывают необходимое количество надосадочной жидкости, а в исходный раствор периодически доливают воды до тех пор. пока на дне есть осадок. Раствор в склянке из темного стекла может храниться неопределенно долго.
