Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Минеев В.Г. -> "Практикум по агрохимии - 2-е изд." -> 175

Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.

Минеев В.Г., В.Г.Сычев, O.A. Амельянчик, Т.Н. Болышева, Н.Ф. Гомонова, Е.П. Дурынина, B.C. Егоров, Е.В. Егорова, Н.Л. Едемская, Е.А. Карпова, В.Г. Прижукова Практикум по агрохимии - 2-е изд.: Учебное пособие — M.: Изд-во МГУ, 2001. — 689 c.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка): prak_agrochem.pdf
Предыдущая << 1 .. 169 170 171 172 173 174 < 175 > 176 177 178 179 180 181 .. 299 >> Следующая

Извлечение фосфолипидов повторяют еще дважды с тем же объемом экстрагента, но с разными временными интервалами, затем осадок промывают водой. Все растворы собирают в колбу Кьельдаля. Делают это так: к осадку приливают 20 см' смеси спирта и эфира,
405
перемешивают, закрывают пробками, изредка премешивают вручную в течение 5 - 6 ч, затем сливают надосадочную жидкость в ту же колбу Кьельдаля.
Осадок в третий раз заливают 20 см3 смесью спирт-эфир, перемешивают тщательно, закрывают конические колбы пробками, оставляют на ночь при комнатной температуре. Надосадочную жидкость переносят методом декантации в колбу Кьельдаля.
Затем осадок промывают дистиллированной водой. Для этого приливают в коническую колбу 10 CMJ ВОДЫ, перемешивают, взбалтывают на ротаторе 5 мин. Осадок сохраняют в колбе, а жидкость переносят в колбу Кьельдаля. Экстракт в колбе Кьельдаля, содержащий спирт, эфир, воду и т.д., перемешивают и упаривают содержимое на водяной бане при t - 800C (появление первых пузырьков) до объема 5 - 7 см3 на дне колбы.
Упаривание растворов, содержащих спирт и эфир, требует особого внимания и осторожности! Нельзя повышать температуру выше указанной! Нагревание раствора должно быть равномерным. Использовать только колбы Кьельдаля с широким горлом.
Содержимое колбы после упаривания охлаждают, доливают 5 см^ концентрированной серной кислоты, перемешивают, закрывают малой воронкой горло колбы или стеклянным затвором. Раствор озоляют до бесцветного состояния на электроплитке. Для ускорения озоления по стенке в охлажденные до комнатной температуры колбы добавляют по каплям концентрированную хлорную кислоту, но не более 1 см3 в сумме.
После окончания озоления содержимое колбы охлаждают, доливают 10 см3 дистиллированной воды, перемешивают, добавляют 50 CMJ горячей воды. Раствор количественно переносят в мерную колбу на 100 см". Колбу Кьельдаля споласкивают малыми порциями горячей воды, эти воды собирают в мерную колбу, доводят содержимое до метки, перемешивают. Это раствор В, который используют для колориметрического определения Р-липидов.
Определение фосфора нуклеиновых кислот
Ход анализа
Осадок в конической колбе после извлечения фосфолипидов обрабатывают 20 см3 1 н. хлорной кислоты, тщательно перемешивают, закрывают плотно пробками (только стеклянными или обернутыми фольгой резиновыми) и ставим колбы в холодильник в конце рабочего дня на 17 часов при t = 3°С.
После этого колбы встряхивают, перемешивают вручную, открывают пробки. Надосадочную жидкость методом декантации переносят в колбы Кьельдаля на 100 - 150 см" через стеклянную воронку без фильтра.
Осадок еще дважды обрабатывают хлорной кислотой для полноты извлечения фосфора нуклеиновых кислот. Для этого приливают к осадку 20 CMJ 1 н. хлорной кислоты, перемешивают стеклянной палочкой с 406 оплавленным концом, ставят на водяную баню, предварительно нагретую до 7O0C на 30 мин, декантируют охлажденный раствор в колбу Кьельдаля. Повторяют извлечение снова, используя 0,5 н. HClO4 в количестве 20 CMj, перемешивают, нагревают на водяной бане 30 мин t = 7O0C Экстрагент собирают в ту же колбу Кьельдаля.
После повторной экстракции на водяной бане осадок из колбы количественно переносят на бумажный фильтр, вложенный в стеклянную воронку и фильтруют содержимое в колбу Кьельдаля. Осадок на фильтре 3-4 раза промывают 3%-й хлорной кислотой очень малыми порциями, которые собирают в ту же колбу Кьельдаля. Это будет раствор С, который содержит Р-нуклеиновых кислот.
Промытый осадок используют для определения Р-протеидов. Для фильтрования раствора необходимо использовать бумажные фильтры малого диаметра, так как большие фильтры сильно удлиняют время озоления.
Раствор в колбе Кьельдаля упаривают на электронагревателе до объема 5-7 см3, охлаждают, затем приливают 7-10 см3 концентрированной серной кислоты. Если при сжигании осадок долго не осветляется, по каплям добавляют немного концентрированной хлорной кислоты.
Раствор из колбы Кьельдаля количественно переносят через стеклянную воронку без фильтра в мерную колбу объемом 100 CMJ, ополаскивая многократно колбу Кьельдаля малыми порциями горячей воды, охлаждают, доводят до метки и перемешивают. Раствор употребляют для определения фосфора нуклеиновых кислот колориметрическим методом, как описано выше.
Определение фосфора протеидов
Ход анализа
После извлечения фосфора нуклеиновых кислот промытый осадок растительного материала на фильтре вынимают на часовое стекло, подсушивают при t = 60 - 700C до слабовлажного состояния.
Сворачивают «бумажную сигарету», закрывают вручную верхний и нижний конец и опускают патрон с осадком в горло колбы Кьельдаля. Используя стеклянную палочку, патрон опускают на дно колбы, приливают 7-10-12 CMj концентрированной серной кислоты. Перемешивают, ставят на ночь в лоток.
Озоление материала идет первоначально при комнатной температуре в течение 10 - 12 ч. Затем осторожно, не допуская бурного кипения, нагревают колбу на электроплитке с асбестом. Сначала наблюдается вспучивание органической массы. Надо снять колбу с огня, перемешать содержимое круговым движением. Сжигать медленно до тех пор, пока масса не превратится в однородную буро-коричневую жидкость.
Предыдущая << 1 .. 169 170 171 172 173 174 < 175 > 176 177 178 179 180 181 .. 299 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed