Аффинная хроматография - Аберкромби Д.
ISBN 5-03-000480-7
Скачать (прямая ссылка):
Литература
1. Longstaff С, Ph. D. Thesis, Liverpool University (1983).
2. Cuatrecasas Р.у J. Biol. Chem., 245, 3059 (1980).
3. Porath J.t Aspberg K., Drevin И., Axen #., J. Chromatogr., 86, 53 (1973).
4. Lamed R., Oplatka A., Reisler ?., Biochim. Biophys. Acta, 427, 688 (1976).
5. Fischer E. A., in: Affinity Chromatography and Related Techniques, Grib-nau Т. C J., Visser J., Nivard R. J. F. (eds.), Elsevier, Amsterdam, 1982y poster A15.
6. Wilson M. B., Nakane P. K., J. Immunol. Methods., 12, 171 (1976).
7. Fischer E. in: Poster 55 presented at the 5th International Symposium on Affinity Chromatography and Biological Recognition, June 12—17 (1983).
8. Moore S., Stein W. tf., J. Biol. Chem., 211, 893 (1954).
9. Moore S., Stein W. #., J. Biol Chem., 211, 907 (1954).
10. Gribnau Т. C Ph. D. Thesis, Nijmegen, The Netherlands (1977).
11. Nilsson K., Mosbach K.t Biochem. Biophys. Res. Commun., 102, 449 (1981).,
12. Kohn J., Wilchek M.t in: Solid Phase Biochemistry, Scouten W. H. (ed.), John Wiley & Sons, New York, 1983, p. 509.
13 Matsumoto L, Mizuno Seno N.t J. Biochem., 85, 1091 (1979).
14. Bethell G. S., Auers J. S.t Hancock W. S., И earn M. T. J. Biol. Chenv 254 2572 (1979)
15. Nilsson K., Mosbach /С., Eur. J. Biochem., 112, 397 (1980).
16. Inman /. K., in: Affinity Chromatography and Related Techniques, Gribnau T. C. J., Visser J., Nivard R. J. F. (eds.), Elsevier Scientific Publishing-Company, Amsterdam, 1982, p. 217.
17. Peterson E. A., Sober H. A., J. Am. Chem. Soc, 78, 751 (1956).
18 Inman J. K.y J. Immunol., 114, 704 (1975).
19 Carlsson /., Drevin H., Axen R., Biochem. J., 173, 723 (1978).
6*
Глава 3.
ПОПЕРЕЧНО-СШИВАЮЩИЕ АГЕНТЫ ДЛЯ ПРИСОЕДИНЕНИЯ ВСТАВОК К МАТРИЦАМ
1. ВВЕДЕНИЕ
Гомо- и гетеробифункциональные реагенты описаны в большинстве руководств по афинной хроматографии. Перечень этих соединений приведен в табл. 1.
2. МЕТОДЫ ПРИСОЕДИНЕНИЯ НУКЛЕОФИЛЬНЫХ ЛИГАНДОВ К КАРБОКСИЛАТСОДЕРЖАЩИМ МАТРИЦАМ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КАРБОДИИМИДОВ
Водорастворимые карбодиимиды могут применяться в виде водных растворов, а дициклогексилкарбодиимид — в растворах органических растворителей, таких, как диоксан, диметилсульф-оксид или 80%-ный (об./об.) водный пиридин. Ниже описывается примерная методика присоединения.
1) Карбоксилатсодержащий носитель (например, карбокси-алкил-стекло, карбоксиалкил-агароза) (2—5 мл) прибавляют к 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимиду или к 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимиду (40 мг), растворенному в воде (10 мл), и доводят pH до 4,0.
2) Добавляют присоединяемый лиганд (10—50 мг белка, или 1 мкмоль— 10 ммоль аминсодержащего лиганда) и перемешивают смесь при комнатной температуре в течение по крайней мере 1 ч (или более длительное время в случае очень низкой концентрации лиганда).
3) Реакцию заканчивают, отделяя шарики фильтрованием и промывая их водой (10 объемов) и 40%-ным (об./об.) водным диметилформамидом (1—2 л). Если позволяет природа матрицы, то более быстрое промывание можно осуществить ацетоном, 100%-ным диметилформамидом или путем кипячения.
Водорастворимые карбодиимиды были использованы также при получении ДНК-целлюлозы (гл. 5, разд. 1). Удобный прием, используемый при промывании стеклянных шариков, особенно при использовании нерастворимых в воде карбодиимидов, заключается в кипячении шариков в течение 5 мин с каждым из указанных выше растворителей или в экстракции соответ-
Поперечно-сшивающие агенты
85
Таблица 1. Бифункциональные соединения, представляющие интерес для аффинной хроматографии
Соединение Литература3
л-Бензохинон 1
Бис- (диазобензидин) 3
3,6-Бис- (меркуриметил) диоксан
Бисоксираны 3
Цианурхлорид лХ-Дифторо-лїЖ-динитрофенилсульфон Дициклогексилкарбодиимид 1
1
Диметиладипимидат 3
Диметилсуберимидат 3
Дивинилсульфон
#,ЛГ-Этиленбис- (иодоацетамид) 3
Глутаровый альдегид 1
Гексаметиленбис- (малеимид) 3
Гексаметилендиизоцианат 3
Пер иода т #,Л^-1,3-Фениленбис-(малеимид) I
1
Феиол-2,4-дисульфонилхлорид 3
Тетраазотированный о-дианизидин 1
Толуолдиизоцианат 1
Водорастворимые карбодиимиды 1
Реагент К Вудворта
В цитируемой литературе содержатся полезные сравнительные данные для многих из указанных реагентов. Выбор связывающего реагента в большой степени зависит от устойчивости присоединяемого лиганда (к pH среды, температуре» растворителю и т. д.). Далее в настоящей главе описаны различные специфические реагенты и рекомендации по их использованию. При наличии сомнений относительно их специфического применения читателю следует обратиться к оригинальным статьям.
ствующим растворителем в течение ночи в аппарате Сокслета. Эта реакция, вероятно, не является самой оптимальной для лигандов, доступных в ограниченных количествах.
3. ПОЛУЧЕНИЕ ГИДРОКСИСУКЦИНИМИД-АГАРОЗЫ
1) Карбокси-агарозу (например, сукцинилированную амино-алкил-агарозу) тщательно промывают безводным диоксаном на пористом стеклянном фильтре с отсасыванием.
2) Агарозу суспендируют в безводном диоксане (3 объема) и добавляют при постоянном перемешивании N-гидроксисукцин-имид до получения раствора с конечной концентрацией 0,1 моль/л по N-гидроксисукцинимиду.
