Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
4. На поверхность слегка застывшего парафина осторожно кладут этикетку надписью вверх.
5. Коробочки помещают на поверхность холодной воды в широкую чашку. Охлаждение парафина необходимо для того, чтобы он меньше крошился во время резки на микротоме.
Рис. 27. Изготовление бумажных коробочек. Цифры указывают последовательность сгибания бумаги. По Д. Кисели.
Рис. 28. Корешки, залитые в парафин: слева — в бумажной коробочке, спраиа — боа коробочки.
Парафин вместе с объектами после охлаждения принимает форму коробочки, в которую его залили («парафиновый пряник»). Если сиять бумажную коробочку, то сквозь полупрозрачный парафин хорошо видны корни'илн бутоны (рис. 28). В таком состоянии материал может долго храниться и легко выплавляется при изготовлении блоков.
Приготовление парафиновых блоков
Для работы на микротоме из «парафиновых пряников» готовят парафиновые блоки, которые укрепляют на деревянных держателях. Держатели устанавливают в объектодержателе микротома. Блок режут на определенную толщину.
В лабораторной практике деревянные держатели иначе называют кубиками. Их готовят из древесины дуба, бука, березы размером 1,5Х2X2,5 см и перед употреблением пропитывают расплавленным парафином. На боковую сторону держателя приклеивают этикетку.
Готовят блоки двумя способами. В первом случае из «пряника» бритвой вырезают кусочки парафина с объектом и расплавленным парафином прикрепляют их к деревянному держателю. В таких блоках материал должен- быть ориентирован определенным образом и окружен со всех сторон слоем парафина толщиной 1—2 мм, Обычно так готовят блоки, содержащие крупные эмбриологические объекты. Лезвием острой бритвы придают блоку форму параллелепипеда, грани которого параллельны граням держателя.
Во втором случае используют метод закапывания по С. Г. Иа-вашину. Он более кропотлив, чем первый, но дает надежные результаты при заливке корней и мелких бутонов. Необходимо заранее приготовить для работы спиртовку, глазной зонд или
:1 12 ® ¦ J4
Рис. 29, Последовательные этапы заливки корешков методом закапывания блоков:
/ — парафиновая капля; 2 -- корешок в капле; 3 — полностью залитый блок; 4 — блок поело обрезки.
серебряную проволочку, парафиновые палочки, этикетки, лезвие безопасной бритвы, скальпель, деревянные держатели и «парафиновый пряник» с материалом.
Парафиновые палочки делают из парафина с такой же температурой плавления, какую имел парафин, использованный для пропитывания материала в термостате. В парафин добавляют 5% воска. Расплавленный и отфильтрованный парафин заливают в коробочки из пергамента длиной 15 см, шириной 30 мм и толщиной 5—8 мм. Коробочки быстро охлаждают в воде, снимают бумагу, а палочки хранят в пустых эксикаторах или картонных коробках.
При изготовлении парафиновых блоков методом закапывания придерживаются следующей последовательности в работе (рис. 29).
1. Рабочую поверхность деревянного держателя нагревают над спиртовкой и на теплую поверхность наносят каплю жидкого парафина. Капля должна быть в центре держателя и иметь максимальный диаметр. Высота ее обычно 3—4 мм. Чтобы аккуратно выполнить эту работу, следует научиться осторожно плавить над спиртовкой парафиновую палочку.
2. Выплавляют объекты с нижней стороны пряника. Для этого вокруг корней или бутонов расплавляют парафин нагретым зондом (см. рис. 26). Когда объект окажется в капле жидкого парафина, его переносят на стекло. Обычно выплавляют несколько корней или мелких бутонов. Если корни имеют неодинаковую длину, то их выравнивают лезвием бритвы. Иногда «пряник» целиком расплавляют в фарфоровой чашке над спиртовкой. Объекты вылавливают и сразу заливают в парафиновый блок. Такие блоки лучше режутся на микротоме.
3. Монтируют объекты в капле парафина на деревянном держателе. Корни устанавливают вертикально (чехликами вверх) для получения поперечных срезов, на которых обычно подсчитывают хромосомы. Для изготовления продольных срезов корни укладывают горизонтально (параллельно одной из длинных сторон держателя). В один блок обычно помещают несколько мелких объектов на одном уровне. Чтобы перенести корни со стекла, их осторожно сдвигают скальпелем, а потом, коснувшись (перпендикулярно!) подогретым зондом, переносят по одному в предварительно расплавленную центральную, часть парафиновой капли.
4. Постепенно подплавляют нагретым зондом парафиновую каплю со всех сторон и окончательно заключают объекты в парафин, накапывая расплавленный парафин небольшими каплями со всех сторон, а затем сверху. Чтобы парафин не сбегал, каждую новую каплю наносят на поверхность пленки блока. При этом не следует быстро отнимать парафиновую палочку от капли.
Правильно залитый блок должен быть однородным. Это удается, когда новые капли парафина наносят на иезастывшую поверхность блока. Закапывание продолжают до тех пор, пока объекты не окажутся внутри прозрачной капли, из которой при остывании не должны выступать кончики корней.
