Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
Блок вместе с держателем опускают в холодную воду. После остывания лезвием безопасной бритвы ему придают форму правильного параллелепипеда или усеченной пирамиды. Обрезку парафинового блока начинают с верхней поверхности. Осторожно снимают лишний парафин, оставляя над объектом слой 2 мм. Затем обрезают блок с боковых сторон, добиваясь, чтобы грани его были параллельны граням деревянного держателя.
Таким образом, объекты заключены в парафиновый блок определенной формы, который можно резать на микротоме.
Получение микротомных срезов
Лабораторный прибор, предназначенный для получения тонких срезов у различных объектов, называют микротомом. Тонкие срезы с объектов, залитых в парафиновые блоки, готовят на микротомах двух типов: салазочном, или санном, и ротационном (рис. 30, А, Б).
Наиболее распространен салазочный микротом, у которого нож свободно перемещается на салазках, а деревянный держатель с парафиновым блоком прочно укреплен в объектодержа-теле, который может подниматься на определенную высоту при помощи микрометрического винта или перемещаться но наклонной плоскости вверх.
Рис. 30. Микротомы:
Л — ротационный; Б — салазочный (Л, Б —¦ по Проз иной, I9li0); В — завораживающий; I —* станина; 2 — иожедержатель; Л ™ нож; 4 — замораживающий столик; 5 ~ игольчатый клапан; 6 — микрометрический винт.
В ротационном микротоме нож укреплен неподвижно острием вверх, а объект движется по вертикали при помощи специального подающего механизма, снабженного колесом или рукояткой.
Кроме рассмотренных двух, существует еще микротом замораживающего типа (рис. 30,В), на котором режут объекты в замороженном состоянии. На столик такого микротома в каплю воды помещают объект и подают к нему угольную кислоту под давлением. Столик охлаждается, объект становится неподвижным в капле, после чего его можно резать. В некоторых случаях охлаждают .не только столик, но и нож. Метод замораживания применяют при диагностических, гистохимических, анатомических и других исследованиях. Здесь трудно получить тонкие срезы, а также непрерывную серию срезов, но зато он прост и требует немного времени.
Важнейшая составная часть микротомов — ножи (бритвы). Микротомные ножи делят на две группы: с плосковогнутой и плоской с двух сторон формой. Первые используют для резки объектов, залитых в парафин, а вторые — для резки заморожен-
Рис. 31. Схематическое изображение правильного (А) н неправильного (Б, В) наклонов ножа. По Ромейсу.
ных и труднорежущихся объектов. Микротомный нож требует тщательного ухода и бережного отношения. Небольшой удар или прикосновение лезвием к плотному предмету портит его. После работы нож вытирают насухо и хранят в футляре. Его необходимо своевременно точить и править. От этих операций зависит качество срезов. При точке влажный нож ведут по камню (из песчаника или карборунда) против лезвия в том и другом направлениях, оборачивая его вокруг обушка на конечных пунктах движения. Перед резкой на микротоме нож правят на ремне для шлифовки фасеток и придания грани большей работоспособности. Нож ведут обушком вперед поперек ремня по всей его длине, используя в работе нижнюю сторону ремня. При правке нож смачивают водой.
Качество срезов на салазочном микротоме зависит от установки наклона ножа, определяемого углом, который образует нижняя поверхность ножа с плоскостью среза объекта. Этот угол должен составлять 2—5°. Допустимо положение, при котором сетка параллельна плоскости резания (рис. 31).
Последовательность работы на санном микротоме.
1. Микротом очищают от пыли и парафиновых стружек, а движущиеся части смазывают вазелиновым маслом. В камеру с микротомом, изготовленную из фанеры или плексигласа (размеры ее зависят от размеров микротома), ставят лампу для подогревания ножа и блока в холодное время.
2. Подготовленный острый нож плосковогнутого типа устанавливают под определенным углом так, чтобы фасетка лезвия была параллельна граням парафинового блокд и перпендикулярна направлению движения. Во время работы нож вытирают тряпочкой, смоченной в ксилоле.
3. Закрепляют деревянный держатель с парафиновым блоком в объектодержателе так, чтобы получить поперечные или продольные срезы. Нож и верхнюю поверхность парафинового блока осторожно сближают.
4. Устанавливают микрометрическим винтом необходимую толщину срезов в микрометрах. Она зависит от объекта и цели исследования. Так, для наблюдения митохондрий толщина сре-
зов — до 5 мкм, для подсчета числа хромосом в корнях—10—15, а при эмбриологических исследованиях — 15—25 мкм.
5. Приступают к резке парафинового блока. Для этого при заднем положении ножа подают объектодержатель на толщину среза, например на 12 мкм. В результате парафиновый блок поднимается вверх к фасетке ножа на это же расстояние. Затем перемещают салазки с ножом к себе и срезают слой парафинового блока толщиной 12 мкм. Отодвинув назад салазки с ножом, снова подают объект при помощи микрометрического винта и передвигают салазки с ножом к себе. Так делают второй срез и т. д. В результате получается непрерывная лента срезов. Если нож во время работы стучит, следовательно, его наклон недостаточен.
