Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
Сморщенные парафиновые срезы надо расправить. Для этого предметные стекла со срезами, плавающими в воде, переносят на ровную поверхность нагревательного столика (приспособление для сушки и расправления парафиновых срезов на предметных стеклах, рис. 32), имеющего латунную пластинку с подогревом от электротока. Во время расправления срезов следят, чтобы со стекол не испарилась вода. Срезы можно расправить и под лампой, а также на подогретых асбоцементных пластинках. Теплые предметные стекла с расправленными срезами переносят на черную поверхность стеклянной пластинки (можно ис* пользовать фотопластинки).
Теперь очень важно расправленные срезы правильно и вплотную уложить так, чтобы они были друг против друга в вертикальном и горизонтальном положениях. Вместе с- тем срезы должны находиться в центре предметного стекла и не выходить за контуры покровного. Чтобы аккуратно уложить срезы, сна-
чала удаляют избыток дистиллированной воды фильтровальной бумагой и скальпелем поправляют их. Окончательно удаляют воду уже после того, как срезы уложены. Для этого на них сверху помещают полоску фильтровальной бумаги и осторожно проводят по ней пальцем. Последнее можно делать только тогда, когда срезы остыли, иначе они приклеятся к бумаге.
Предметное стекло со срезами подписывают обычным графитовым карандашом, если оно матировано, или тушью с белком, для чего жидкую черную тушь смешивают с равным объемом смеси куриного белка с глицерином. Используют также алмазный карандаш. Затем предметное стекло немедленно ставят сушить в термостат при температуре 40°С. Следует помнить, что если срезы высохнут при комнатной температуре, они потом отстанут от стекла. Сушку в термостате ведут двое-трое суток.
Срезы пристают к стеклу вследствие капиллярного притяже-пия. Если они приклеены хорошо, при просматривании их с нижней стороны предметного стекла не должно быть отсвечивающих мест. Последнее указывает иа то, что между стеклом и ере’ зами остался воздух. Такие срезы легко отклеятся, как. только окажутся в жидкости.
Существуют и другие способы наклеивания срезов на предметные стекла, например с использованием белка с глицерином. Для этого к свежему куриному белку добавляют равный объем глицерина. После взбалтывания смесь фильтруют. Фильтрация протекает медленно. В фильтрат добавляют кристаллик антисептика (тимола, фенола).
Есть два варианта наклеивания срезов белком: сухой и водный. В первом случае иа предметное стекло наносят каплю белка с глицерином и кончиком пальца или льняной тряпочкой растирают его тонким слоем. Переносят срезы на стекло кисточкой. Сначала к стеклу прижимают один угол среза, а потом и весь срез. Предметные стекла со срезами подогревают, после чего их можно сразу подвергнуть дальнейшей обработке.
Белково-глицериновую смесь можно разводить водой: 1 каплю смеси взбалтывают с 4 мл дистиллированной воды. Воду с белком и глицерином наносят пипеткой на предметное стекло, в нее помещают срезы. Срезы расправляют на нагревательном столике, удаляют избыток жидкости и сушат.
Удаление парафина и окрашивание срезов
Парафиновые срезы, наклеенные на предметные стекла, непосредственно изучать под микроскопом трудно. Для выявления отдельных компонентов клетки необходимо освободить их от парафина, а затем окрасить. Последовательность работы следующая.
1. Освобождение срезов от парафина ксилолом.
Рис. 33. Набор стеклянных цилиндров в деревянном штативе для окрашивания препаратов.
2. Удаление ксилола путем замещения его на 96%-й раствор спирта.
3. Удаление спирта промывкой срезов в воде.
4. Протравливание с последующей промывкой (применяется не всегда).
5. Окрашивание и промывание.
6. Дифференцирование и промывание (применяется не всегда).
7. Обезвоживание срезов в 96%-м растворе и 100%-м спирте.
8. Замещение спирта на ксилол.
9. Заключение в канадский бальзам.
Приведенная схема берется за основу при различных методах окрашивания постоянных препаратов, отличающихся в деталях в зависимости от того, применяют один или несколько красителей, какой используют способ окрашивания, как проводят обезвоживание и т. д.
Перед началом работы выбирают метод окрашивания, составляют схему работы, подбирают посуду и готовят растворы. Очень удобны цилиндрические сосуды высотой 11—12 см и диаметром 5 см с притертыми крышками (рис. 33). Эти сосуды с наклеенными этикетками в определенной последовательности помещают в деревянные бруски с гнездами. Одновременно готовят стаканы для промывания препаратов в воде, капельницы с ксилолом, абсолютным этиловым спиртом и 96%-м его раствором, чистые покровные стекла, пинцеты, канадский бальзам, марлю и фильтровальную бумагу. Для дифференцировки необходимы набор кювет с растворителем и микроскоп. Канадский бальзам готовят, растворяя кристаллы бальзама в ксилоле до консистенции, напоминающей жидкий пчелиный мед.
Переносят препараты из одного сосуда в другой' пинцетом, избегая загрязнения реактивов, что может отразиться на качестве препаратов. Например, ксилол можно занести в спирт, и тогда при последующем переносе препаратов в воду они станут
