Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
Чтобы ускорить обезвоживание, можно промывать объект в 96%-м растворе спирта. Это делают после таких фиксаторов, как ледяная уксусная кислота, уксусный алкоголь.
Для окончательного удаления остатков воды из фиксированного материала, находящегося в 80%-м растворе спирта, его помещают еще в четыре его раствора : два из них имеют концентрацию 96% и два — по 100%. В каждом из них объект выдерживают около 1 ч. Более длительное пребывание фиксированного материала в 100%-м спирте придает ему хрупкость, что нежелательно.
Следует заметить, что спирт не только обезвоживает, но п несколько уплотняет ткани. И то, и другое необходимо для последующей заливки материала в парафин.
Приготовление раствора спирта заданной концентрации. Спирты различной концентрации (20,40,60 и 80%-й), необходимые для частичного обезвоживания промытого материала, обычно готовят разведением 95—96%-го раствора этилового спирта. При этом пользуются правилом Леви или специальными таблицами.
Согласно правилу Леви для приготовления из двух растворов неодинаковой концентрации третьего с промежуточной концентрацией необходимо взять первый раствор в объеме, равном разности концентраций третьего и второго растворов, и добавить к нему второй раствор в объеме, равном разности концентраций первого и третьего растворов.
Например, нужно приготовить 20%-й раствор спирта из 95%-го и дистиллированной воды. Для расчета применяют следующую форму записи:
95 О
\ /
20
ч/ "Чб
Цифра 75 в нижнем ряду справа равйа разности концентраций первого и третьего растворов (95—20=75). Она указывает, сколько нужно взять миллилитров дистиллированной воды.
Цифра 20 в том же ряду слева равна разности концентраций третьего и второго растворов (20—0 = 20). Она указывает, сколько нужно взять миллилитров 95%-го раствора спирта. Итак, нужно взять 20 мл 95%-го раствора спирта и 75 мл дистиллированной воды для получения 95 мл 20%-го раствора спирта. Для получения 40, 60, 80%-х растворов аналогичным образом берут соответственно 40, 60, 80 мл 95%-го раствора и доводят дистиллированной водой до 95 мл. Так можно получить спирт любой концентрации, меньшей 95%.
Иногда необходимо получить спирт заданной концентрации из двух спиртов, один из которых имеет концентрацию выше требуемой, а другой ниже. Например, из 70%-го и 20%-го растворов нужно приготовить 40%-й. Поступают так же, как и в первом примере:
70 20
\ /
40
ч/ \о
Из расчетов видно, что к 20 мл 70%-го раствора спирта надо добавить 30 мл 20%-го и получим 50 мл 40%-го раствора спирта.
При обезвоживании используют и 100%-й этиловый спирт, который иначе называют абсолютным. Приготовить его из 95— 96%-го раствора можно несколькими способами: при помощи безводного сульфата меди, обезвоженного желатина в листках, дистилляцией спирта, в который добавлен оксид кальция.
В лабораторной практике наиболее распространен первый способ. Берут сульфат меди, полностью обезвоженный (аморфный порошок белого или бледно-голубого цвета) или содержащий несколько молекул кристаллизационной воды — медный купорос (крупные кристаллы темно-синего цвета).
Обезвоженный сульфат меди можно сразу использовать для окончательного удаления остатков воды из 95—96%-го раствора спирта. Медный купорос предварительно измельчают в ступке и осторожно прокаливают в фарфоровой чашке при температуре около 200 °С, постоянно помешивая, чтобы не допустить по-бурения порошка. В результате соль теряет кристаллизационную воду и приобретает почти белый цвет. После остывания ее используют для обезвоживания спирта.
На 1 л спирта берут 200—250 г сульфата меди. Его насыпают на дно банки с притертой крышкой и заливают 95—96%-м раствором спирта. Обезвоженная соль активно поглощает остатки воды из спиртового раствора и приобретает голубой цвет. Частично обезвоженный спирт на другой день переливают в бутыль со свежим сульфатом меди. Обезвоживание повторяют несколько раз, до полного удаления воды. Последнее проверяют по цвету соли меди: если она при заливке спиртом сохраняет бе-
лый цвет, следовательно, в нем нет больше воды, т. е. спирт стал абсолютным. Более точно это определяют специальным прибором для измерения концентрации спирта.
Чтобы приготовить спирт без мути, порошок сульфата меди насыпают в бумажные гильзы из фильтровальной бумаги и по нескольку штук опускают на дно банки со спиртом.
Следует помнить, что абсолютный спирт, полученный с использованием сульфата меди, ядовит, так как содержит иоиы меди. Кроме того, может измениться его кислотность.
Пропитывание промежуточной жидкостью и парафином
Для получения тонких мйкротомных срезов толщиной в несколько микрометров материал необходимо залить в парафин, который представляет собой смесь углеводородов (реже.используют целлоидин или желатин). Температура плавления его может быть различной. Для цитоэмбриологических исследовании лучше брать парафин с температурой плавления 52—54 °С. Он не смешивается со спиртом и водой, но хорошо растворяется в хлороформе, ксилоле, бензоле, толуоле. Промышленность выпускает гомогенизированный парафин в виде полупрозрачных белых плиток без примесей и пузырьков воздуха. Имея набор парафинов с различной температурой плавления, можно составить из них нужное вещество.
