Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
6. Срезы в виде ленты снимают с ножа мягкой кисточкой и укладывают в определенной последовательности на черную поверхность дна длйниой, по неглубокой коробки, в которую помещают этикетку. Верхняя и нижняя поверхности ленты неодинаковы по внешнему виду: первая матовая, вторая блестящая. Ленту укладывают в коробку, не переворачивая ее, т. е. блестящей стороной вниз. После этого приступают к наклеиванию срезов па предметные стекла. Микротом после работы необходимо очистить от стружек и поместить в футляр.
Неудачи при изготовлении срезов. Рассмотрим возможные затруднения и причины неудач при получении микротомных срезов.
1. Срезы мнутся и прилипают к ножу. Это может быть вызвано высокой температурой в камере с микротомом или тем, что взятый для заливки парафин оказался слишком мягким. Указанные причины можно устранить изменением температуры в камере и перезаливкой материала в более твердый парафин.
2. Срезы крошатся. Это происходит из-за низкой температуры в камере или оттого, что парафин слишком твердый и медленно охлаждается во время заливки блока. Обе причины также устранимы.
; 3. Срезы полосатые, раскалываются вдоль. Объясняются подобные дефекты тем, что нож имеет зазубрины. В таком случае его передвигают.
4. Срезы сдергиваются с ножа при его обратном ходе. Это
значит, что нож грязный с нижней стороны и его необходимо вычистить. ч
5. Лента искривляется. Часто такое явление наблюдается потому, что передний и задний края блока не параллельны лезвию ножа. Для его устранения осторожно обрезают парафинов вый блок, придав ему правильную форму.
6. Микротом делает «пропуски» или срезы получаются неодинаковой толщины. Следовательно, нож стоит слишком полого и необходимо изменить его наклон.
7. Срезы получаются волнистые (гофрированные). Чаще всего это объясняется плохой заливкой блока, и необходимо залить блок снова.
8. Объект выпадает из блока во время резки на микротоме. Это явление может быть вызвано плохим пропитыванием материала, что не всегда удается устранить. Другая причина его может заключаться в том, что материал пропитывался в термостате более мягким парафином, чем тот, которым закапывался блок. Необходимо также проверить, не затупился ли нож.
Наклейка парафиновых срезов на предметные стекла
Подготовка предметных и покровных стекол. Очень важный момент в работе — подбор предметных и покровных стекол для препаратов. От толщины стекол зависит правильная фокусировка препаратов. Световой микроскоп имеет объективы с определенным рабочим расстоянием (у иммерсионных объективов оно равно 0,1—0,12 мм). Ясно, что этими объективами можно воспользоваться в том случае, если толщина предметного и покровного стекол не выходит за допустимые величины, а именно 1 —1,2 мм для предметных и 0,17 мм для покровных стекол. Кроме того, стекла должны иметь ровную поверхность, без мутных пятен и царапин. Поэтому предварительно следует отбраковать стекла.
Следующий момент, на который необходимо заранее обратить внимание, — чистота стекол. Наклеенные срезы хорошо держатся только иа абсолютно чистой поверхности.
Обычно предметные стекла очищают так: кипятят в мыльной воде, промывают в водопроводной и при необходимости опускают в хромовую смесь, состоящую из трех частей насыщенного водного раствора бихромата калия и одной части концентрированной серной кислоты. При этом нужно помнить, что кислоту вливают в дихромат калия, а не наоборот.
Из хромовой смеси стекла вынимают пинцетом и промывают проточной и дистиллированной водой. У чистых стекол поверхность полностью смачивается водой. Отобранные стекла помещают в стакан с дистиллированной водой, где они хранятся до употребления. Очень удобны в работе предметные стекла с матированными концами, на которых можно делать надписи обычным карандашом.
Покровные стекла отбирают размером 20X20 или 24X24 мм, более крупные применяют только для эмбриологических исследований. Очищают стекла в смеси спирта и эфира, вытирают мягкой тряпочкой и хранят в сухом виде до использования.
Наклейка парафиновых срезов. Подготовив предметные стекла, можно приступить к наклеиванию парафиновых срезов. Для этого вынимают пинцетом одно стекло из сосуда с
Рис. 32. Нагревательный столик для расправления микротомных срезов:
1 — предметное стекло с препаратом. По М. Н. Прозиной.
дистиллированной водой и, держа его пальцами за края, вытирают чистой тряпочкой нижнюю поверхность. Затем кладут стекло на ровную поверхность стола.
Наклеивать срезы можно разными способами. Наиболее распространенный способ с использованием обычной дистиллированной воды. Однако он дает хорошие результаты, только если предметные стекла будут абсолютно чистыми.
Порядок работы следующий. На поверхность предметного стекла из капельницы наносят несколько капель дистиллированной воды. Скальпелем разрезают парафиновую ленту на отрезки с равным количеством срезов. Каждый отрезок переносят скальпелем на поверхность воды, соблюдая последовательность расположения срезов. Необходимо также следить, чтобы нижняя (блестящая) сторона их непосредственно касалась воды. Общее число срезов, которые можно уложить на одно предметное стекло, рассчитывают, принимая во внимание величину покровного стекла. Отрезки парафиновой ленты лучше укладывать перпендикулярно длинной стороне предметного стекла.
