Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
Гомогенизированный парафин перед употреблением расплавляют и выдерживают в таком состоянии в термостате один или несколько дней для того, чтобы улетучились нежелательные примеси. К тугоплавкому парафину прибавляют 5% пчелиного воска. Для хрупких объектов к парафину с температурой плавления 54—60 °С, кроме воска, добавляют 5% стеарина. От механических примесей парафин освобождают фильтрованием в термостате на обычном фильтре. Так можно очищать все обрезки парафина, образовавшиеся во время работы.
Температуру плавления парафина легко определить следующим образом. Берут стеклянный капилляр, термометр и стакан с водой. Капилляр заполняют расплавленным парафином и после застывания парафина привязывают к термометру, помещают в стакан с водой, которую при этом медленно подогревают. Отмечают температуру в тот момент, когда парафин расплавится.
Успешно заключить объект в парафин удается только в том случае, если было проведено тщательное обезвоживание фиксированного материала в 96%-м растворе и 100%-м этиловом спирте. Однако и в этом случае его не сразу помещают в парафин, поскольку спирт с парафином не смешивается. Обычно после абсолютного спирта материал переносят в так называемую
промежуточную жидкость—растворитель парафина, который позднее заменяют чистым парафином (табл. 1).
1. Растворители парафина и их основные свойства
Название Растнореиие Температура Растворимость в спирте
растворителя парафина при кипения,
50 °С. % “С
Ксилол 20,8 140 Очень хорошая
Бензол 21,5 80 То же
Толуол 25,0 111 Растворяется с трудом
Хлороформ '25,0 61 Очень хорошая
Важнейшие требования к растворителю; он должен хорошо смешиваться со спиртом и растворять парафин при температуре его плавления, легко испаряться при тон же температуре.
Хороший растворитель парафина для мелких объектов (корни и бутоны)— хлороформ, а для крупных—бензол и ксилол. Это обусловлено тем, что последние два растворителя не так быстро испаряются, как хлороформ, поэтому пропитывание материала парафином идет успешнее. Хлороформ, используемый как растворитель парафина, не должен содержать воды. Для этого его наливают в темную бутыль, на дно которой насыпают безводный хлорид кальция слоем 3—4 см и выдерживают некоторое время.
Обезвоженный в спирте материал пропитывают растворителем парафина не сразу, а постепенно. Обычно готовят три смеси хлороформа с абсолютным спиртом с постепенно возрастающей концентрацией хлороформа:
1 ч. хлороформа 4- 3 ч. абсолютного опирта;
1 ч. хлороформа 4- I ч. абсолютного спирта;
3 ч. хлороформа + 1 ч. абсолютного спирта.
В каждой из этих смесей материал выдерживают около часа. Для более крупных объектов время увеличивают. В дальнейшем материал переносят в первую, а затем во вторую склянку с чистым хлороформом, каждый раз оставляя в нем на час или более. После этого чистый хлороформ в объекте замещают на парафин следующим образом. Корни или бутоны вместе с этикеткой переносят в небольшие стеклянные стаканчики диаметром 2,5 см и высотой 3 см с хлороформом, уровень которого на
3--4 мм выше материала. В эти стаканчики наливают расплавленный парафин и ставят их в термостат с постоянной температурой 56—57 °С, т. е. на 2—3°С выше температуры плавления парафина. Здесь материал, выдерживают несколько суток. За это время хлороформ испаряется, а объект пропитывается парафином. Окончательное испарение хлороформа устанавливают по отсутствию запаха у парафина- в стаканчиках (проверяют каждый стаканчик).
Термостат, в котором находится материал, должен иметь надежный терморегулятор, чтобы поддерживать постоянную температуру, не допуская больших скачков, отверстия для притока воздуха и оттока паров хлороформа и достаточно толстые стенки. Он не должен искрить. Промышленность выпускает для заливки парафина термостат ТВЗ-25. Электрические контакты терморегулятора не должны находиться на пути оттока паров бензола или ксилола, в противном случае возможен взрыв. Термостат необходимо поместить в вытяжной шкаф, так как пары хлороформа вредны для здоровья. При отсутствии вытяжного шкафа вентиляционное отверстие термостата соединяют с водоструйным насосом, выводной конец которого не должен выходить за пределы лаборатории.
Когда материал пропитается парафином, в стаканчики добавляют еще немного чистого расплавленного парафина и спустя некоторое время выливают содержимое в подготовленные бумажные коробочки (рис. 27), металлические или фарфоровые формочки, в которых парафин быстро застывает. При этом соблюдают такую последовательность работы.
1. Заранее готовят бумажные коробочки из пергамента или другой плотной бумаги.
2. Вынимают пинцетом' этикетки из стаканчика, а содержимое выливают в коробочку.
3. Корни или бутоны быстро и равномерно раскладывают по дну коробочки нагретым пинцетом.
