Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
3. В журнале регистрации фиксаций записывают те же сведения об объекте и варианте исследования, которые имеются на этикетке в вазоне, в поле или чашке Петри. Кроме того, указывают цель работы и те данные, которые будут необходимы при обработке результатов научных исследований, например вид специальной обработки корней перед фиксацией, число корней, особенности растения, метеорологические условия и др.
4. Подготовленные чистые пробирки с вложенными в них этикетками раскладывают по вариантам исследования около соответствующих растений или чашек Петри.
5. Непосредственно перед фиксацией готовят смесь Нава-шина. Для приготовления 1%-ного раствора хромовой кислоты берут 1 г хромового ангидрида и растворяют в дистиллированной воде, доводя объем до 100 мл.
16%-й раствор формалина готовят так: берут 16 мл 40:%-го (неразведенного) формалина и доводят дистиллированной водой до 40 мл.
Перед употреблением смешивают 10 ч. 1%-го раствора хромовой кислоты, 4 ч. 16%-го раствора формалина и 1 ч. ледяной уксусной кислоты.
В пробирку наливают 7—10 мл готового фиксатора. Устанавливают ее вертикально без пробки в специальную подставку или небольшой стаканчик, на дно которого положена вата. Сверив этикетки, начинают фиксировать. Затем пробирки переносят в темное место, чтобы фиксатор не разлагался на свету.
6. Растения из вазонов, перевернув последние вверх дном, осторожно выбивают. При этом растение с комом земли держат в левой руке. Ножницами отрезают кончики молодых корней. Быстро помещают их в фиксатор и погружают в него стеклянной палочкой или встряхиванием пробирки. Зафиксировав достаточное число корней, сосуд с ними нужно поместить на 2—3 мин под колокол воздушного насоса, чтобь! избавиться от пузырьков воздуха и облегчить проникновение фиксатора. Можно сделать и так: открытые пробирки с материалом, находящимся в фиксаторе Навашина, поместить в эксикатор, соединенный с водоструйным насосом. Это также ускоряет фиксацию.
Проросшие семена по одному вынимают пинцетом из бактериологических чашек, отрезают кончики корней и фиксируют.
Такая же последовательность работы соблюдается при фиксации эмбриологического материала. В этом случае при необходимости осуществляют кастрацию цветков и опыление.
Эмбриологический материал обычно фиксируют через определенные промежутки времени после нанесения пыльцы на рыльце (так называемая темпоральная фиксация). Для этого составляют график фиксаций в течение одних или нескольких суток, в зависимости от цели исследования. Чтобы ускорить проникновение фиксирующей смеси в крупные объекты, применяют метод вакуум-инфильтрации. Для этого собирают несложную установку, состоящую из эксикатора с краном, вакуумной резиновой трубки, тройника с краном и вакуумного насоса системы Комовского.
Продолжительность обработки зависит от состава фиксатора и объекта. Иногда возникает необходимость заменить фиксатор свежим. Например, фиксатор Навашина в летнее время быстро портится, что легко определить по внешнему виду жидкости. В этом случае корни или бутоны заливают свежей смесью. Хранить материал в фиксаторе можно лишь в отдельных случаях.
Промывание и обезвоживание
Промывание. При использовании наиболее распространенных фиксаторов (Кариуа, Навашина) материал через определенное время промывают, чтобы полностью удалить остатки фиксатора. После водных фиксаторов его промывают в проточной во-, де 1—3 ч, иногда дольше. Для этого объект вместе с этикеткой переносят из пробирок в марлевые мешочки, которые перевязывают суровыми нитками, и помещают в высокий стеклянный или фарфоровый стакан с воронкой, наполненный водой. Все это ставят под кран с проточной водой. Описанный способ промывки довольно прост и легко выполним, если в лаборатории нет специальных приборов. В летнее время материал промывают 1—
2 ч, в зимнее— 2—3 ч. Более 3—4 ч промывать не рекомендуется, так как хромосомы после этого хуже окрашиваются, а края их оказываются как бы разъеденными.
Обезвоживание. Промыв материал в воде, его частично обезвоживают в этиловом спирте. Чтобы избежать сморщивания тканей, обезвоживание ведут постепенно, используя серии растворов спирта возрастающей концентрации. Марлевые мешочки вынимают по одному из стакана с водор и развязывают. Корни или бутоны вместе с этикеткой осторожно, но быстро, чтобы материал не подсох, переносят в пробирки с 20%-м раствором спирта, который затем заменяют 40, 60 и 80%-ми его растворами. В каждой из пробирок материал находится по 30 мин. В 80%-м растворе спирта его можно хранить длительное время. Для этого пробирки с корковыми пробками опускают концами в расплавленный парафин, чтобы спирт не улетучивался во время хранения.
После спиртовых фиксаторов, таких, как фиксатор Карнуа, материал промывают трижды по 1—2 ч в 80%-м растворе спирта, до полного исчезновения запаха уксусной кислоты. Для этого заранее готовят три склянки со спиртом одной концентрации и на них наклеивают этикетки: 80%-й спирт 1, 80%-й спирт 2 и 80%-й спирт 3. Из пробирок через марлю сливают фиксатор и тотчас же, не допуская подсыхания материала, наливают в них 80%-й раствор спирта 1, который через 1—2 ч заменяют раствором 2, а еще позднее — раствором 3. Промытый материал оставляют на хранение в 80%-м растворе спирта. Фиксированный материал можно хранить и в 70%-м растворе спирта.
