Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 35

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 29 30 31 32 33 34 < 35 > 36 37 38 39 40 41 .. 122 >> Следующая

антиидиотипическо-му ответу после перекрестной иммунизации животных
одного вида (изологичный или аллогенный антиидиотип) или между животными
разных видов (гетерологичный антиидиотип). Эти два подхода позволяют
наиболее успешно получать антиидио-типические антитела, которые способны
заменять иммуноген. Ниже представлены некоторые методы получения
антиидио-типов.
6.6.2. Мышиные антитела к идиотипам мыши (аплогенные]
Антиидиотипические антитела к моноклональным антителам в высоком титре
были получены у мышей BALB/c, которых иммунизировали иммунными
комплексами, состоящими из очищенного парапротеина человека (IgGi),
конъюгированного с определенными моноклональными антителами мышей BALB/c
[42]. Последние были направлены к эпитопу А-цепи или к постоянным
эпитопам Су2- или С^З-доменов тяжелой цепи. Можно использовать комплексы,
содержащие пул МК.А к ч- ИЛи A-цепям человека. Преципитат комплекса
готовили,, добавляя небольшой избыток МКА или их смеси (асцитная жидкость
после центрифугирования) к 1 мг/мл парапротеина человека в присутствии
5%-ного ПЭГ (мол. масса 3000). Преципитаты отмывали на холоду 5%-ным ПЭГ
и разводили PBS до концентрации парапротеина 1 мг/мл. Мышей прими-ровали
в/б 100 мкг парапротеина в составе комплекса в смеси с 109 убитых клеток
В. pertussis и алгидрогелем. Бустер-ное введение того же количества
комплекса без В. pertussis проводили на 6, 13, 20 и 27-й или на 26, 40 и
48-й дни. Такие схемы позволяли получить высокие титры изологичных анти-
идиотипических антител (через 7 дней после последней инъекции),
специфичных к моноклональным антителам в составе комплекса, а также
антитела к парапротеину человека.
6.6.3. Кроличьи антитела к идиотипам кролика (аплогенные}
Аллотипы иммуноглобулинов кролика кодируются несколькими генетическими
локусами. У аутбредных животных любой донор и реципиент будут иметь
различия. При использовании одной линии (донор и реципиент принадлежат к.
одной и той же линии) требуется высокая степень инбредно-стй, по крайней
(мере по локусам а и Ь. Легко получить анти-идйотипичес'кие антитела,
направленные к идиотопам-анти-
Получение поликлональных антител и контроль их качества
87
тел, специфичных к полисахариду P. vulgaris, у животных, совпадающих по
аллотипу. При этом используют ту же методику с применением бактерий,
нагруженных антителами, что и для получения аллотипспецифических антител,
однако может понадобиться 4-5 курсов иммунизации.
Можно вызвать образование антиидиотипических антител к аффинно очищенным
кроличьим антителам, не прибегая к приготовлению комплексов [43]. При
этом в/м вводят 100- 200 мкг антител с НАФ (в равных объемах) повторно с
интервалами в несколько месяцев.
Более быстрый ответ может быть получен повторными в/в инъекциями
очищенных кроличьих антител, связанных с помощью глутарового альдегида с
собственными эритроцитами реципиента [43].
1. Собирают свежие эритроциты с помощью гепарина и отмывают стерильным
физиологическим раствором.
2. Осадок (15 мкл клеток) суспендируют в 300 мкл кроличьих антител (300
мкг) в 0,15 М фосфатном буфере и 20 мкл 2,5%-ного глутарового альдегида.
3. Выдерживают суспензию 1 ч при 4 °С, затем трижды отмывают и
ресуспендируют в 3 мл стерильного физиологического раствора.
Кроликам вводят 1 мл эритроцитов, нагруженных антителами, в 1, 7, 10, 13
и 17-й дни. Курс повторяют через 2 нед, кровь берут через 1 нед после
последней инъекции. Специфичность по отношению к идиотипу может быть
проверена с помощью реакции гемагглютинации при использовании
эритроцитов, нагруженных Ig данного идиотипа (метод отличается высокой
чувствительностью).
6.6.4. Кроличьи антитела к мышиным идиотипам (гетеропогичные) [44]
Кроликов иммунизировали глобулиновой фракцией мышиной асцитной жидкости,
содержащей моноклональные антитела. Эту фракцию получали преципитацией
18%-ным сульфатом натрия и диализом против PBS. При каждом введении
использовали 2,5 мкг белка. Первую инъекцию осуществляли в/м в оба бедра
в комплексе с НАФ. Бустерные инъекции осуществляли через 6 нед в две
точки п/к с НАФ, а на четвертом месяце - также, но без адъюванта. Кровь
брали спустя 10 дней.
При иммунизации гетерологичным иммуноглобулином преимущественно
образуются антитела к изотипическим и ал-лотиИическим детерминантам
чужеродного антитела. Это требует проведения абсорбции. В данном случае
успешной абсорбции достигают при повторном пропускании кроличьей ан-
88
Глава 2
тисыворотки (5 мл) повторно через 10-мл колонку с нормальным мышиным
иммуноглобулином, связанным с гелем сефарозы, пока не исчезнут вое
антитела к нормальным Ig мыши и мышиным моноклональным антителам, кроме
моноклональных антител донора.
6.6.5. Антитела морской свинки к идиотипам кролика (гетерологичные)
Другой эффективный подход к получению специфических гетерологичных
антиидиотипических антител заключается в подавлении нежелательного ответа
к изотипическим детерминантам донорских антител [45]. Морским свинкам
Предыдущая << 1 .. 29 30 31 32 33 34 < 35 > 36 37 38 39 40 41 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed