Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 29

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 23 24 25 26 27 28 < 29 > 30 31 32 33 34 35 .. 122 >> Следующая

области лопаток или боковых отделов туловища с помощью 25-мм иглы № 20.
Шерсть в области инъекции выстригают изогнутыми ножницами и протирают
кожу спиртом. Таким образом обычно проводят бустерные иммунизации с
адъювантами Фрейнда.
Внутримышечные инъекции. Кролика держат на коленях н оператор вытягивает
в сторону заднюю лапу, обхватив колено снизу, шерсть на поверхности бедра
над коленом выстригают. Протирая кожу спиртом, выявляют поверхностные
кро-ьеносные сосуды. Иглу (40 мм, №21) вводят глубоко в бедро под углом
вперед; впрыскивают до 0,5 мл раствора антигена, убедившись, что игла не
находится в просвете глубоко лежащего сосуда. Затем иглу извлекают и
место инъекции тщательно протирают для удаления вытекающей жидкости.
Данный способ обычно используют для введения адъюванта Фрейнда.
V. Овца.
Работа с овцами обычно не вызывает проблем. При проведении большинства
процедур сидящий сзади животного ассистент удерживает его, фиксируя
коленями спину и руками наклоняя голову вверх и в сторону. Для в/м
инъекций животное удерживают в положении стоя от движения вперед, мягко
обхватив рукой грудь.
Подкожные инъекции. Обычно эти инъекции осуществляют в участок кожи,
лишенный шерсти, в области складки между верхней частью бедра и нижним
отделом живота в
Получение поликлональных антител и контроль их качества
73
положении животного сидя. Место инъекции протирают, кожу приподнимают
щипком. 1-5 мл раствора иммуногена или до 0,5 мл эмульсии адъюванта
Фрейнда вводят с помощью 25-мм иглы № 20 с обеих сторон.
Внутримышечные инъекции. В положении животного стоя выстригают шерсть на
участке задней поверхности бедра и с помощью стеклянного 1-мл шприца и
50-мм иглы № 19 вводят глубоко в толщу мышц бедра до 1 мл эмульсии
адъюванта Фрейнда.
Внутривенные инъекции. Шею животного вытягивают поворотом головы в
сторону, поднимая подбородок вверх. Шерсть на участке шеи выстригают.
Большим пальцем мягко надавливают на шею сбоку выше грудины для выявления
наружной яремной вены. Протирают кожу спиртом и с помощью 30-мм иглы № 23
вводят в вену 5 мл и более раствора. Следят за тем, чтобы голова все
время, пока вводят препарат, была хорошо фиксирована.
5.2. Взятие проб крови
Общее положение: У каждого животного перед иммунизацией необходимо взять
пробу крови; при работе с мышами обычно смешивают образцы крови, взятые у
нескольких животных.
5.2.1. Мышь
Мышь фиксируют как для внутривенных инъекций и согревают хвост теплой
водой. Затем его высушивают тканью и мяпко натирают вазелином, а кончик
смачивают 70%-ным спиртом. Несколько миллиметров хвоста отрезают острыми
стерильными ножницами. Мягко массируя хвост сверху вниз, обеспечивают
поступление крови, которую собирают в небольшую стеклянную пробирку.
Таким образом можно собрать до 0,5 мл крови и повторять эту процедуру
еженедельно. Кровотечение останавливают, сжимая кончик хвоста тампоном,
смоченным спиртом. Предпочтительно, учитывая столь малый объем, собирать
плазму и использовать силиконированные пробирки, что позволяет каплям
крови сбегать до дна и предотвращает свертывание. Перед взятием крови
можно поместить в пробирку небольшой объем (50 мкл) гепарина,
разведенного физиологическим раствором. Кровь как можно скорее
центрифугируют в небольших пластиковых преципитационнных пробирках. Пробы
хранят отдельно в маленьких конических пробирках с крышками при -20°С.
74
Глава 2
5.2.2. Крыса
Взятие проб крови у крыс обычно осуществляют путем .кардиальной пункции
под анестезией, используя камеру, заполненную смесью эфира с воздухом.
Крысу извлекают в состоянии коллапса и помещают на спину на кусок ткани.
Небольшую мензурку с пропитанной эфиром ватой помещают перед носом
животного для поддерживающей анестезии. Шприцем на 1- 2 мл с помощью 30-
мм иглы № 23 пунктируют грудную клетку ниже мечевидного отростка грудины,
держа грудную клетку между указательным и большим пальцами левой руки.
Слегка втягивая поршень на себя, убеждаются в том, что игла попала в
сердце. Шприц медленно наполняют и извлекают иглу. Крысы быстро выходят
из эфирного наркоза, и их можно поместить в клетку, как только они
полностью приходят в сознание. Таким способом можно взять до 1-2 мл крови
один раз в неделю. Данную процедуру должен выполнять только специалист,
имеющий соответствующий опыт.
5.2.3. Морская свинка
Забор крови у морских свинок тоже осуществляют путем кардиальной пункции,
но после анестезии фентанилом/флуани-зоном (гипнормом), который вводят
в/м в дозе 1 мг/кг массы тела. Время наступления наркоза у морокой
свинки, по нашим наблюдениям, составляет не менее 15 мин. Описан метод
введения гипнорма крысам внутрибрюшинно [31], этот путь может быть
использован и для анестезии морских свинок. Препарат разводят в
соотношении 1 : 10 дистиллированной водой и вводят из расчета 0,7 мл/100
г массы тела.
5.2.4. Кролик
Взятие крови у кролика производят из краевой вены уха. Животное кладут на
колени и оборачивают полотенцем или халатом, оставляя открытой голову,
Предыдущая << 1 .. 23 24 25 26 27 28 < 29 > 30 31 32 33 34 35 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed