Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 34

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 28 29 30 31 32 33 < 34 > 35 36 37 38 39 40 .. 122 >> Следующая

раза в неделю курсами по 3-4 нед, давая животным отдых в течение
нескольких недель между курсами. Обычно начинают с дозы 106-107
микроорганизмов, которую по мере развития ответа увеличивают до 109 и
более. Это позволяет компенсировать нейтрализацию бактерий антителами in
vivo и быстрое удаление опсонизиро-ванных бактерий из лимфоидных тканей.
6*
84
Глава 2
I. Campylobacter jejuni, серотипы 1, 2 и 4 [37]. Бактериальные культуры
отбирают на логарифмической фазе роста в концентрации 108 клеток/мл.
Суспензию отмывают, обрабатывают формалином и доводят оптическую
плотность до 0,375 при 625 нм. Авторам удавалось получить антисывороткн с
очень высоким титром, вводя суспензию сначала по 1 мл, а затем по 2 и 3
мл в/в два раза в неделю (курс 3 нед). Забор крови осуществляли через
неделю после последней инъекции. Для повышения специфичности
антнсыворотку сорбировали грам-отрицательными бактериями других видов и
иных серотипов данного вида [37].
II. Пневмококки типа III, антитела к углеводному компоненту S3. Очищенный
компонент пневмококка S3 обладает чрезвычайно низкой иммуногенностью (или
не обладает совсем) для кролика. Однако введенный в/в вместе с
мембранными белками убитых нагреванием микроорганизмов, он вызывает
эффективное образование IgG, отличающихся высокой типовой и антигенной
специфичностью. С помощью повторных курсов получают не менее 5 мг/мл
специфических антител, и у многих животных можно повысить концентрацию
IgG в сыворотке до 20 мг/мл и более. Данный ответ не зависит от влияния
белковых иммуногенов на синтез антител. В одном из наших экспериментов
[38] кролики получали не менее двух курсов по девять в/в инъекций в
течение 19 дней; начальная доза составляла 108 микроорганизмов, с шестой
инъекции - 4-• 109, а в конце дозу доводили до 1010 микроорганизмов.
Кровь забирали через 3-4 дня после последней инъекции.
III. Proteus vulgaris (tpХ19). Высокие титры IgG к углеводным антигенам
протея 'получают с помощью формалнни-знрованных суспензий. Получение
таких антисывороток у кроликов, различающихся по аллотипам
иммуноглобулинов, представляет собой первый этап наработки гомологичной
ал-лотнпспецифической сыворотки (кроличьей против кроличьего
иммуноглобулина). При этом различающиеся по аллотипу антитела донора
используют в виде комплексов "антитела - антигены Proteus".
На первом этапе кроликам вводят 109 клеток Proteus и 2 раза по 2-109 на
8-й и 11-й день, а затем - по 5-109 на 15-й и 18-й день. Через три недели
курс повторяют. Кровь берут через три дня после каждого курса; титр
остается высоким в течение 10 дней, что позволяет взять кровь еще дважды.
Получение поликлональных антител и контроль их качества
85
6.5. Антисыворотки к аллотипам иммуноглобулинов
6.5.1. Мыши
Суспензию клеток В. pertussis (1011) нагружают избытком антител к этим
бактериям, полученным от инбредных мышей (например, C57BL), которые имеют
тот или иной аллотип иммуноглобулина (структурный вариант тяжелой цепи,
характерный для данной линии). Процедуру осуществляют в течение двух
часов при 37 °С. После отмывания 2-109 нагруженных антителами
микроорганизмов вводят в/в или в/б аллоген-ному реципиенту (например,
мышам линии BALB/c). Курс (4 инъекции один раз в неделю) может быть
повторен после трехнедельного перерыва. Подробно методика описана
Парсоном и соавт. [39].
6.5.2. Кролики
Кроликов иммунизируют суспензией клеток Proteus, нагруженных антителами,
по методике, предусматривающей образование специфических антител. Число
необходимых курсов зависит от иммуногенности данного аллотипа [40].
6.6. Получение антиидиотипических антител
6.6.1. Принцип метода
Антигенсвязывающие центры антител имеют сложную структуру. Антитела
данной специфичности воспринимаются иммунной системой организма как
клональный продукт, несущий набор эпитопов (идиотопов). Эти эпитопы носят
общее название - идиотип, и они могут стимулировать аутологичный
антиидиотипический ответ. Рассматриваемая как система внутреннего
распознавания, обеспечивающая экспансию и регуляцию активности клеток-
эффекторов, сеть идиотипов и анти-идиотипов, как правило, неизмеримо
велика и неопределенно сложно устроена. Однако в некоторых
экспериментальных условиях повторное введение препарата определенных
очищенных антител в комплексе с адъювантом может нарушить эту регуляцию и
вызвать довольно сильный антиидиотипический ответ. Это явление используют
не только для формального доказательства существования идиотипов и
антиидиотипов, но и для подтверждения одного из главных предсказаний
теории- наличия у некоторых антиидиотипов такого строения идиотипов,
которое представляет собой "внутренний образ" энитопов первого
(экзогенного) иммуногена. Можно получить амтиидиотииические антитела,
которые способны заменить им-
86
Глава 2
муногены для иммунизации животного [41] и служить антигенами-мишенями для
различных иммунологических методов исследования. Собственная
иммуногенность очищенного антитела (его идиотипа) приводит к сильному
Предыдущая << 1 .. 28 29 30 31 32 33 < 34 > 35 36 37 38 39 40 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed