Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 101

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 95 96 97 98 99 100 < 101 > 102 103 104 105 106 107 .. 122 >> Следующая

эритроциты используются в качестве источника антигена. tB данной главе мы
остановимся на описании наиболее распространенных методов, основанных на
применении эритроцитов в реакции гёмагглютинации и гемолитических тестах
с целью выявления антител. /В принципе эритроциты могут связываться не
только антителами, (Специфическими по отношению к их )мембранным
антигенам ('прямые тесты), но и антителами к антигенам, которые
"нагрузили" на /Поверхность (c)ритроцитов (непрямые или пассивные тесты).
Такие очевидные преимущества прямых гемагглютинационных и гемолитических
^тестов, как удобство и высокая чувствительность, побудили исследователей
разработать методы присоединения различных раствофимых антигенов к
эритроцитам. Данный подход увенчался успехом и способствовал развитию
многочисленных /модификаций пассивных тестов.
Общепризнано, что эритроцит представляет собой наиболее .пригодный
корпускулярный "носитель" для пассивной аг-
Гемагглютинация и реакции антителозависимого гемолиза
239
глютинации, хотя эта система еачастую и считается "старомодной". -
Искусственные частицы, изготовленные из полистирола, полиакриламида или
аминополистирола, успешно использовались для связывания белков [1, 2],
однако основанные на их применении агглютинационные тесты .оказались
"менее чувствительными, чем реакция гемагглютинации [3,4].
Эритроциты различных .видов животных значительно варьируют дю величине,
форме, стабильности и способности к агглютинации. Эритроциты человека
превосходят эритроциты барана до размерам и по способности к
агглютинации, бычьи же эритроциты обладают наименьшей способностью к
агглютинации, .причем эта способность значительно варьирует от животного
к животному [5]. Степень агглютинации эритроцитов любого жида животных
можно 'повысить, обрабатывая их трипсином, нейраминидазой н другими
ферментами, обнажающими поверхностные структуры клеточных мембран.
Наиболее /часто в лабораторных тестах применяют эритроциты .барана (ЭБ),
поскольку они не требуют .предварительной обработки. О'писанные ниже
методики предполагают использование именно данных эритроцитов. 'Очень
важен правильный подбор, животных для получения крови. Кровь,
приобретенная 'Коммерческим Путем, как правило, получена от случайных
животных на бойне, причем качество эритроцитов зачастую оказывается
невысоким. Более .удовлетворительный материал удается получить дутем
регулярного забора 'крови от баранов, содержащихся в специальных дент.рах
(при этом бараны предпочтительнее, нежели овцы, поскольку эритроциты
беременных животных отличаются большей хрупкостью) /и отобранных из
большой группы животных в результате предварительного тестирования крови.
Принцип количественных, как .пря'мых, так и пассивных,
гемагглютинационных 'тестов аналогичен. Обычно используют .пластиковые
панели для микротитрования с 96 (12x8) U-образными лунками объемам 250
1мкл ,(рис. 7.1). .Готовят .последовательные разведения антисывороток в
лунНах Панели и затем в них добавляют буспензию эритроцитов. .Если в
лунке с данным разведением сыворотки количество агглютинирующих антител
достаточно для образования перекрестных связей между поверхностными
антигенами соседних эритроцитов, то эти клетНи (слипаются, или
агглютинируются. Если разведение антител слишком высоко и они не способны
связать 'клерки между собой, то эритроциты оседаю'т на 'дно лунки в виде
компактной "бляшки". Конечной точкой титрования, или титррм сыворотКи,
считают последнее ее разведение, Которое еще агглютинирует эритроциты.
Глава 7
:Нормальная контрольная сыворотка
Тестируемая сыворотка 1
Тестируемая Сыворотка 2
Тестируемая j
сыворотка 3 |
P8S, контроль S
Рис. 7.1. Паиель для микротитроваиия, используемая для постановки реакции
прямой гемагглютииации. Ряды луиок размечены для исследуемых
сывороток и контролен
У большинства видов животных агглютинирующими свойствами обладают как
IgG, так и IgM. Антитела класса М более эффективны в реакции
агглютинации, поскольку отличаются высокой валентностью. Прямые и
пассивные тесты позволяют количественно (по титрам агглютинации)
сравнивать между собой различные сыворотки при условии точной
стандартизации условий эксперимента. Некоторые антиэритроцитарные
антитела, полученные от человека или экспериментальных животных, слабо
агглютинируют либо совсем не агглютинируют эритроциты как в .прямых, так
и в пассивных тестах. Причина этого может заключаться в недостаточном
количестве либо в малой доступности антигенных детерминант на поверхности
клеток. Другая причина - принадлежность исследуемых антител к классу G,
которые представляют собой неэффективные агглютинины. Такие антитела
можно выявить, связывая их с эритроцитами и используя анти-глобулиновые
сыворотки к иммуноглобулиновым детерминантам. Такие сыворотки получают
путем иммунизации животных соответствующими антителами. Описанный тест
был разработан Кумбсом для обнаружения так называемых "неполных" антител,
Предыдущая << 1 .. 95 96 97 98 99 100 < 101 > 102 103 104 105 106 107 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed