Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 100

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 94 95 96 97 98 99 < 100 > 101 102 103 104 105 106 .. 122 >> Следующая

ПААГ.
236
Глава 6
5. Для выявления антигенов можно использовать аффинно очищенные
антииммуноглобулины, меченные радиоактивным иодом, или меченый белок А
стафилококков. Эти реагенты применяют в сочетании с авторадиографией.
Используя белок А, следует помнить, что он связывает лишь некоторые
изотипы антител (19]. При таком способе окрашивания к каждой полоске
нитроцеллюлозы достаточно добавить в пересчете на радиокативность по 105
имп./мин-мл любого из препаратов. После инкубации в течение 30-60 мин
полосы многократно и очень тщательно отмывают PBS и лишь затем переходят
к авторадиографии. Методы радиоактивного мечения антител рассматриваются
в кн. 2.
6. Авторадиографию выполняют следующим образом:
а) помещают полосы нитроцеллюлозы на стекло и накрывают сверху листом
рентгеновской пленки и вторым стеклом. Работать следует в темной комнате
при безопасном освещении (например, темно-коричневая лампа Kodak 6В).
Стекла скрепляют друг с другом клейкой лентой и укладывают в
светонепроницаемую кассету или черный полиэтиленовый пакет, который
хранят под графитовым экраном. Можно приобрести различные типы
рентгеновской пленки (см. приложение). Для использования усиливающего
экрана требуются пленки, покрытые эмульсией с двух сторон. Это позволяет
увеличить чувствительность в случае очень слабого жесткого излучения.
Усиливающий экран прикладывают к пленке с противоположной стороны от
нитроцеллюлозы.
б) пленку экспонируют от 1 до 14 дней - в зависимости от изотопа
(например, 1251 или 1311) и специфической активности антител. При
использовании усиливающего экрана пленку экспонируют при -70 °С.
в) проявляют пленку проявителем Kodak D19 при комнатной температуре и
безопасном освещении. Время проявления 5 мин.
Литература
1. Ouchterlony О. In: Progress in Allergy, Kallos P. and Waksman В. H.
(eds.), Karger, Basel, Vol. VI, p. 30 (1958).
2. Elek S. D. Br. Med. J., 1. 493 (1948).
3. Grabar P., Williams C. A. Biochem. Biophys. Acta, 10, 193
(1953).
4. Laurell С. B. Anal. Biochem., 15, 45 (1966).
5. Laurell С. B. Scand J. Clin. Lab. Invest., 29, 124, Suppl.
(1972).
6. Ressler N. Clin. Chim. Acta, 5, 795 (1960).
7. Mancini G., Vaerman J. P., Carbonara A. O., Heremans I. E. In:
Protides. Biological Fluids, Peeters H. (ed.), Pergamon Press, Oxford,
Vol. II, p. 370, 1964.
8. Mancini G., Carbonara A. O., Heremans J. F. Immunochemistry, 2, 235
(1965).
Иммунодиффузия, ИЭФ, иммунохимичеекое окрашивание_____________237
9. Burneite W. N. Anal. Biochem., 112, 195 (1981).
10. Gershoni I. М., Palade G. E. Anal. Biochem., 131, 1 (1983).
11. Stites D. P., Rogers R. P. C. In: Basic and Clinical Immunology, Sti-
tes D. P., Stobo J. D. and Wells J. V. (eds.), Appleton and Lange,
Norwalk/Los Altos, p. 241, 1987.
12. Williams C. A. In: Methods in Immunology and Immunochemistry,
Williams C. A. and Chase M. W. (eds.), Academic Press, New York, Vol.
Ill, Chapter 14, p. 238, 1971.
13. Milford-Ward A. In: Techniques in Clinical Immunology, Thompson R. A.
(ed.), Academic Press, 2nd edition, p. 1, 1980.
14. Osier A. G. In: Methods in Immuunology and Immunochemistry, Williams
C. A. and Chase M. W. (eds.). Academic Press, New York, Vol. Ill, Chapter
13, p. 83, 1971.
15. Nilsson L.-A. In: Immunoassays for the 80s. Voller A., Bartlett A.
and Bidwell D. (eds.) MTP Press, Lancaster, UK, Chapter 5, p. 43, 1981.
16. Bussard A. Biochim. Biophys. Acta, 31, 258 (1959).
17. Towbin H., Strahelin Т., Gordon J. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76,
4350 (1979).
18. Haid A., Suissa M. In: Methods in Enzymology, Fleischer S. and
Fleischer B. (eds.), Academic Press, New York, Vol. 96, p. 192, 1983.
19. Johnstone A., Thorpe R. Immunochemistry in Practice, Blackwell
Scientific Publications,, Oxford, 2nd edition, 1987.
ГЛАВА 7
ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ И РЕАКЦИИ АНТИТЕЛОЗАВИСИМОГО ГЕМОЛИЗА
Н. Р. Линг и Д. Кэтти
1. Введение
Все 'микрокорпускулярные антигены (например, бактерии, дрожжи, лейкоциты
и эритроциты) могут агглютинироваться антителами, направленными' к их
поверхностным антигенным детерминантам. Этот .феномен диироко
используется для изучения поверхностных антигенов клеток ,и
микроорганизмом, а также для выявления антител. Добавление к антителам
сывороточною (Комщлемента . позволяет в некоторых случаях разработать
модификации тестов, основанные на явлении цитотоксичности и лизисе
клеток-мишеней. 'Реакцию лизиса лучше всего наблюдать при использовании
эритроцитов, ло-(c)тому гемолиз Применяют для определения как содержания
лизирующих антител, так и концентрации комплемента - последнее в так
называемой реакции связывания комплемента.
В ряде случаев 'эритроциты представляют собой естественные мишени для
антител у человека. Примером могут служить изоагглютинины (к
эритроцитарньш антигенам системы АВО, определяющим группу крови:
аутоантитела при некоторых аутоиммунных заболеваниях, а также при резус-
несо-вместимости матери и плода (см. кн. 2). В некоторых случаях
Предыдущая << 1 .. 94 95 96 97 98 99 < 100 > 101 102 103 104 105 106 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed