Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 27

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 122 >> Следующая

концентрация) четырехокисью осмия в физиологическом растворе.
4. Выдерживают суспензию при комнатной температуре 30 мин, затем
интенсивно диализуют против воды.
5. Отделяют липосомы от свободного иммуногена центрифугированием (1000g),
включение белка определяют методом Лоури.
6. Для инъекции разводят суспензию липосом BSS до необходимой
.концентрации заключенного в них иммуногена.
5*
68
Глава 2
Яд гадюки (Echis carinatus), заключенный в обработанные осмием липосомы,
инъецировали внутривенно по 0,2 мл мышам и получали антитоксические
антитела в высоком титре на протяжении всей жизни животных [30]. Подобные
продолжительные ответы развивались и после одной внутривенной или
подкожной инъекции яда кроликам или внутривенно - овцам.
5. Иммунизация и взятие крови у животных
5.1. Инъекции
5.1.1. Основные положения
1. Независимо от способа введения используют шприц минимального объема
(желательно новый одноразовый или стерильный стеклянный) и новую плотно
присоединенную иглу соответствующего размера.
2. Всегда дезинфицируют место инъекции тампоном, смоченным спиртом. В
области инъекции должна быть сбрита шерсть, чтобы хорошо были видны кожа
и поверхностные вены. После извлечения иглы прижимают место инъекции
тампоном и убеждаются, что кровотечение остановилось.
3. Животное не должно находиться в состоянии стресса, держите его
уверенно, при необходимости пользуйтесь помощью ассистента. Не делайте
инъекций в одиночку без предварительной тренировки.
5.1.2. Специальные положения
1. Для введения эмульсий адъювантов всегда используют стеклянный шприц
Люэра.
2. При внутримышечном введении препарата на требуемую глубину втягивают
поршень немного на себя, чтобы убедиться, что игла не находится в
просвете кровеносного сосуда.
• 3. Избегают попадания в поверхностные кровеносные сосуды.
4. Соблюдают осторожность, проводя повторные внутривенные инъекции
растворимых иммуногенов, поскольку многие животные предрасположены к
системным реакциям гиперчувствительности немедленного типа.
5. Инъекции адъювантов (приводящих к депонированию антигена) в подушечки
лап вызывают боль и нарушение ходьбы, их желательно исключить из
практики. Аналогичные результаты можно получить, вводя антиген другим
способом.
Получение поликлональных антител и контроль их качества
69
6. Используя ПАФ, следят за тем, чтобы эмульсия не следовала по ходу
иглы по мере ее извлечения и не оставалась в поверхностных тканях. Это
может привести к изъязвлениям •кожи, которые причиняют боль и легко
инфицируются.
5.1.3. Способы введения иммукогена
Животных можно иммунизировать внутрикожно (в/к), подкожно (п/к),
внутримышечно (в/м), внутрибрюшинно (в/б) или внутривенно (в/в). Выбор
способа введения зависит от природы вводимого вещества, вида животного и
режима иммунизации.
1. В/к инъекции редко используют для инициации иммунного ответа, но к ним
часто прибегают для бустерной иммунизации антигенами, растворенными в
физиологическом растворе, особенно при работе с "роликами и морскими
свинками. Реакция Артюса (которая часто развивается при подобных
инъекциях) приводит к медленному высвобождению иммунных комплексов,
формирующихся in situ, в регионарные лимфатические узлы.
2. П/к и в/м способы используют для иммуногенов, введенных в адъювант
Фрейнда, поскольку они приводят к образованию гранулом вокруг депо и
медленному высвобождению иммуногена в регионарные лимфоузлы.
3. Антигены, адсорбированные на квасцах, можно вводить различными
способами, хотя обычно их вводят в/м или в/б и редко -в/в.
4. Клеточные и бактериальные суспензии, суспензии липо-сом и растворы
иммуногенов обычно вводят в/б или в/в. Достаточное количество .материала,
введенного в/б (даже суспензия клеток), быстро поступает в циркуляцию и
активирует клетки селезенки. При в/б введении можно предотвратить гибель
животного от реакции гиперчувствительности при повторном введении
растворимых иммуногенов. Однако даже в/б иммуноген нужно вводить медленно
или малыми дозами повторно через несколько часов (дней). ПАФ нельзя
назначать внутрибрюшинно, поскольку он вызывает разлитой перитонит.
5.1.4. Техника инъекций
I. Мыши.
Внутривенные инъекции. Этот вид инъекций представляет наибольшие
технические трудности, особенно у животных темной окраски, и требует
большого опыта. Предварительно не-
70
Глава 2
обходимо потренироваться, используя 0,1%-ный (вес на объем) раствор
синего Эванса в физиологическом растворе. Инъекцию осуществляют в
дорзальную хвостовую вену. Мышь помещают в держатель, например
изготовленный из 60-мл пластикового шприца, пропускают в отверстие хвост
и погружают его в теплую (не слишком горячую) воду на 2 мин для
расширения вен. Затем держатель запирают и кончик хвоста захватывают
большим и указательным пальцами так, чтобы указательный палец поддерживал
хвост снизу. Иммуноген должен быть заранее набран в 1-мл шприц.
Убеждаются, что воздух удален и поршень перемещается свободно. Используют
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed