Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 28

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 22 23 24 25 26 27 < 28 > 29 30 31 32 33 34 .. 122 >> Следующая

10-мм иглу № 25. Протирают кожу хвоста спиртом. Держа иглу острием вниз
(скосом вверх), осторожно вводят ее в вену, продвигая почти параллельно
хвосту. Вена находится очень близко к поверхности, и при правильном
введении иглы ее стенка почти не оказывает сопротивления. Продвигают иглу
на 5 мм по ходу вены и вводят препарат, нажимая на поршень большим
пальцем или ладонью. Сначала медленно вводят небольшой объем, чтобы
проверить, поступает ли жидкость в вену. Если ощущается упругость и
появляется вздутие, то это свидетельствует о том, что игла не находится в
просвете вены. Тем не менее инъекцию можно попытаться осуществить,
приподнимая хвост животного. Взрослой мыши можно ввести одновременно до
0,7 мл раствора антигена.
Внутрибрюшинные инъекции. Мышь извлекают из клетки, держа за хвост правой
рукой, и опускают на крышку клетки. Как только передними лапками мышь
схватится за крышку, большим и указательным пальцами левой руки
захватывают кожу за головой, смещая ее вниз. Затем мышь можно
безбоязненно перевернуть. Закладывают хвост под мизинец так, чтобы мышь
оказалась растянутой на левой ладони животом вверх. Протирают брюшную
стенку спиртом. Держа 1-2-мл шприц с 10-мм иглой № 25 в правой руке,
вводят иглу в середину нижнего левого квадранта живота, направляя ее под
углом около 20° к коже в сторону грудной клетки. Надавливают на поршень и
извлекают иглу. За один раз взрослой мыши можно в/б ввести до 2 мл
жидкости, но предпочтительно - не более 1 мл, поскольку большие дозы
могут вытекать из места прокола.
Внутримышечные инъекции. В бедренную мышцу можно ввести до 50 мкл
жидкости. Животное держат так же, как при в/б инъекциях. Ассистент
выпрямляет заднюю лапку. Шерсть с задней поверхности бедра выстригают
изогнутыми ножницами, место укола протирают спиртом и вводят препарат,
используя 10-М'М иглу № 25.
Подкожные инъекции. Мышь лучше держать так же, как
Получение поликлональных антител и контроль их качества
71
для внутрибрюшинных инъекций, но препарат вводят под кожу в сгиб между
дорзальной поверхностью бедра и животом; 0,2 мл может быть введено с
каждой стороны.
II. Крыса.
При всех способах введения может быть использована та же техника, что и
для мышей. Подкожные инъекции можно проводить под легко смещающуюся кожу
над лопатками или в боковых отделах. Складку .кожи поднимают и вводят до
0,5 мл жидкости, направляя иглу под углом 45°. Внутримышечные инъекции
проводят в бедро, используя 25-мм иглу № 20. Эти же иглы обычно
используют для в/б инъекции, которые позволяют ввести до 5 мл препарата.
Для иммунизации крыс необходим опытный ассистент. Для в/в введений
требуется специальная фиксирующая клетка.
III. Морская свинка.
Внутрикожные инъекции. Этот вид инъекций легко воспроизводим у морских
свинок и кроликов. В обоих случаях сначала сбривают шерсть и протирают
кожу спиртом. Используют стеклянный туберкулиновый шприц с делениями 0,1
мл и 10-мм иглу № 25. Иглу мягко вводят в растянутую кожу под острым
углом к поверхности и, осторожно надавливая и вращая, продвигают на 3-4
мм. Аккуратно вводят 0,1 мл жидкости с образованием папулы. Иглу, вращая,
извлекают и место введения вытирают для удаления вытекающей жидкости.
Внутривенные инъекции. Их осуществляют в вену переднего края уха. Тонкую
туберкулиновую 10-мм иглу №26 обламывают у основания и на тупой конец
надевают найлоновый катетер длиной около 15 см. Другой конец катетера
через обычную иглу присоединяют к 1-2-мл стеклянному шприцу. Морскую
свинку оборачивают в полотенце так, чтобы голова была открыта, выстригают
шерсть изогнутыми ножницами на переднем крае уха, которое затем согревают
смоченной в горячей воде ватой. Как только вена хорошо наполняется, ее
пунктируют в направлении головы. Рекомендуется использовать морских
овинок-альбиносов. Через вену уха можно ввести до 2 мл раствора.
Внутримышечные, внутрибрюшинные и подкожные инъекции. Руководствуются той
же техникой и используют те же объемы, что и при работе с крысами.
Морские свинки очень чувствительны к белкам микобактерий, поэтому
подкожные инъекции ПАФ могут привести к образованию язв. Используя этот
адъювант, необходимо ограничиваться минимальными
72
Глава 2
объемами. Следует избегать старой методики введения ПАФ или НАФ в
подушечки стоп, поскольку она необязательно обеспечивает развитие
эффективного гуморального ответа. Рекомендуем небольшие количества
препарата вводить в/м в бедро (в дорзальную поверхность), вытягивая
заднюю лапку в левой ладони.
IV. Кролик.
Внутривенные инъекции. В этом случае используют 1 -
2-мл шприц и 16-мм иглу № 25. Иммуноген вводят в вену заднего края уха.
Шерсть уха сбривают скальпелем и смачивают поверхность уха 70%-ным
спиртом. Иглу вводят в направлении головы. Кролика лучше фиксировать на
коленях ассистента, мягко надавливая руками на лопатки животного. Обычная
доза-1-2 мл, но можно ввести без особых затруднений до 5 мл раствора.
Подкожные инъекции. До 0,5 мл может быть введено под легко смещаемую кожу
Предыдущая << 1 .. 22 23 24 25 26 27 < 28 > 29 30 31 32 33 34 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed