Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 - Гоулдстей Дж.
Скачать (прямая ссылка):
внден пик в области лучево-
го сосуда, как на снимке а, так и на снимке б.
12.1.4.1. Массивные образцы
Так называются образцы, которые слишком толсты для прохождения или
фотонов, или электронов и для которых морфологическая информация может
быть получена лишь в режиме на отражение. Несмотря на то что массивные
образцы все меньше используются в рентгеновском микроанализе из-за
плохого пространственного разрешения в этом режиме (5-8 мкм), все же в
ряде случаев на них можно получать полезную информацию [390, 391, 301].
Твердые ткани, такие, как кости, раковины, древесина и ископаемые, могут
быть разломлены, и эти образцы пригодны для качественного анализа. Однако
их поверхности настолько нерегулярны, что производить точный
количественный анализ практически невозможно. Эту проблему молено
частично преодолеть полировкой поверхности, но во избежание загрязнений
нужно пользоваться чистыми абразивами.
Концентрация элементов, X сух.веса
О-
1 мкм
Рис. 12.2.
а - высушенная на воздухе
клетка спермы человека, проанализированная в ЭММА. Субклеточные области
анализа указаны кружками.
/ - субклеточный остаток; 2 - акросома; 3 - ядро; 4 -- средняя часть; 5 -
хвост; б - элементный состав высушенных на воздухе клеток спермы человека
от 20 доноров. Маркеры показывают стандартное отклонение от среднего
[208].
Средняя часть
Препарирование биологических образцов для РМА
271
Можно также анализировать поверхности излома мягкого материала, но лишь
после того, как либо ткань пройдет стабилизацию, обезвоживание,
укрепление, либо будет изготовлен излом ткани при низкой температуре и
она будет исследована и проанализирована высушенной в замороженном
состоянии или замороженной в гидратированном состоянии. Последние
исследования |[303, 295] показали, что можно получать большие площади
гладких изломов поверхностей на замороженных в гидратированном состоянии
массивных образцах и что при условии оптимальной геометрии образец -
детектор методика может дать полезную аналитическую информацию об
образцах, с которых трудно делать срезы при низких температурах, т. е. с
-самых молодых растительных тканей.
12.1.4.2. Микроорганизмы, изолированные клетки и органеллы
В настоящее время имеется много надежных биохимических и механических
методов, которые дают возможность изолировать отдельные клетки и
органеллы. Эти методы не будут обсуждаться, но будет рассмотрено, как
такие клетки и фрагменты тканей можно изучать в рентгеновском
микроанализаторе. В качестве примера плодотворного исследования одиночной
клетки служит рис. 12.2, на котором представлены результаты исследований
и анализа клеток спермы человека в электронном микроскопе-
микроанализаторе [208]. В некоторых отношениях изолированные клетки и
органеллы, толщина которых составляет всего лишь несколько микрон, можно
рассматривать как самостоятельный объект исследования, но их чрезвычайная
мягкость и высокое содержание воды налагают серьезные ограничения на
возможные используемые способы препарирования. В зависимости от их
размера изолированные клетки и органеллы, а по этой причине
неорганические материалы в виде частиц для аналитических целей могут
рассматриваться либо как массивные образцы, либо как срезы. Некоторые
примеры препарирования изолированных клеток приведены в недавно
опубликованных работах [392, 393].
12.1.4.3. Неорганические частицы и волокна
Иногда бывает полезно проводить анализ на частицах материи, которые были
либо выведены из тканей физиологическим раствором, собраны в виде сухого
порошка по типу метода фильтрации, либо по отдельности были изолированы
из матрицы ткани методом микроманипуляции. В работе [394] разработана
простая методика получения реплик экстракцией, с по-
272
Глава 12
мощью которой с исходной поверхности или поверхности излома
изготавливается пластиковая реплика. Имевшиеся на поверхности образца
частицы удаляются с репликой и могут быть проанализированы. Сухие частицы
могут быть проанализированы in situ на фильтре, если только ойи
достаточно хорошо диспергированы, иначе их заливают смолой, которую затем
либо разламывают и полируют, либо разрезают на части. Альтернативным
методом является приготовление на основе водного раствора суспензии из
частиц и распыление ее тонким слоем на подходящей подложке. Частицы также
встречаются в матрице органического материала, откуда они могут быть
удалены промыванием в растворе гипохлорита натрия, кипячением в сильных
растворах КОН или озолением в плазме газового разряда низкого давления.
Пример такого типа анализа чужеродных тел в ткани дан в недавно
опубликованной работе [395], где выявлялось наличие асбеста в легочной
ткани.
12.1.4.4. Жидкие образцы
Наибольший интерес в биологическом рентгеновском микроанализе
сконцентрирован на изучении физиологически активных жидкостей, которые
могут быть получены из одиночных клеток или из пространства, окруженного
несколькими клетками. Были разработаны методы извлечения таких жидких
