Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гоулдстей Дж. -> "Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1" -> 97

Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 - Гоулдстей Дж.

Гоулдстей Дж., Ньюбери Д., Эчлин П., Джой Д., Фиори Ч., Лифшин Э. Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 — М.: Мир, 1984. — 348 c.
Скачать (прямая ссылка): rastovayaelektronnayamicroskopiya1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 91 92 93 94 95 96 < 97 > 98 99 100 101 102 103 .. 139 >> Следующая

коллоидный углерод. Важно закрасить маленькую область на подложке образца
и провести краской по ее краю и объектодержателю. Затем образец нужно
поместить на несколько часов в печку с температурой 313 К или в
эксикатор-с низким давлением, чтобы быть уверенным в том, что
растворитель проводящей краски полностью испарился до нанесения на
образец подходящего покрытия. При монтаже мембранных фильтров необходимо
принимать меры предосторожности, так как проводящая краска может
проникнуть в фильтр под действием капиллярных сил и завуалировать образец
и/или растворители краски могут растворить пластмассовые подложки
образцов. Поскольку из аппарата для сушки в критической точке или из
камеры для лиофильной сушки образцы выходят сухими, их можно
непосредственно закреплять различными методами на металлическом
держателе. Одним из самых простейших способов является использование
двусторонней липкой ленты. Образцы .насыпаются или осторожно наносятся на
клей, а в случае больших образцов проводящая паста легким мазком
наносится от основания образца через липкую часть на металлический
объектодержа-тель. Так как двухсторонняя липкая лента является плохим
проводником, важно создать проводящий мостик между образцом и
металлической подложкой.
Образцы могут крепиться к объектодержателям с помощью различных клеев,
липких элементов и проводящих паст. В работах [378, 379] проделано
тщательное изучение различных имеющихся клеев и даны соответствующие
рекомендации. Безотносительно к тому, какой липкий элемент используется,
важ-
'256
Глава 1t
но, чтобы он не загрязнял образцы, не оставлял пластик, в который мог бы
погрузиться образец, и содержал легко удаляемые летучие растворители. Он
должен быть также стойким к умеренному нагреву и облучению электронным
пучком.
Металлическая подложка для образца должна быть чистой и иметь хорошую
поверхность, что позволило бы легко крепить образцы. Без особого труда на
один и тот же объектодержатель можно помещать несколько различных
образцов. Индикаторные метки можно просто нацарапать на поверхности, а
различные образцы надо крепко закрепить во избежание взаимного
загрязнения и ложной интерпретации.
После того как высушенные образцы смонтированы и липкое вещество высохло,
через тонкую трубку полезно обдуть поверхность образца чистым воздухом,
чтобы удалить потерянные кусочки и загрязняющую пыль. Затем либо на
образец наносится покрытие и он изучается в РЭМ, либо его помещают в
сухой контейнер без пыли.
11.3.9. Проводимость образца
Биологический материал обладает высоким электрическим сопротивлением
порядка 108 Ом/м и быстро заряжается под действием облучения электронным
пучком высокой энергии. Проводимость биологического материала может быть
существенным образом повышена за счет добавки тяжелых материалов или
неметаллических проводящих материалов либо в виде тонкого слоя на
поверхности образца, либо заполнением всего материала солями тяжелых
металлов. Методики нанесения покрытий достаточно подробно обсуждались в
гл. 10, здесь лее будут кратко изложены альтернативные методы.
11.3.10. Заполнение тяжелыми металлами
Каждый акт заключительной фиксации, когда образец в течение пары часов
находится в четырехокиси осмия, повышает содержание тяжелого металла в
образце. Как указывалось ранее, полезно также разделить на блоки
окрашенные образцы после фиксации солями таких тяжелых металлов, как
свинец, висмут, уран и т. д. Свойства блоков тканей или больших образцов,
оказывающие влияние на формирование изображения, улучшаются, если
поместить эти блоки или образцы на 2 ч в свежеприготовленный насыщенный
раствор уранилацетата при комнатной температуре. Перед обезвоживанием
блоки тщательно промываются в дистиллированной воде и могут быть
использованы как для просвечивающей, так и растровой электронной
микроскопии.
Препаривание биологических объектов для РЭМ
257
Рис. 11.24. Изображение в РЭМ обработанной четырехокисью осмия ткани
яичка с последующим блочным окрашиванием уранилацетатом и покрытием Au/Pd
толщиной 5 нм. Фотография получена при 18 кэВ (а). Изображение в РЭМ
обработанной четырехокисью осмия ткани печени, покрытой слоем An/Pd
толщиной 5 мкм. Фотография получена при 20 кэВ (б) [384].
258
Глава И
"яг-i- г *• - ъ, mL
-ч"г -'"v, ,¦
¦
Sr"
ШрШШ
ишии
-
¦ВНН
здуяъ
(r)P?sSi
V"
¦¦
ill
. ¦
ШШ
¦* ,*
It-
,1щ

¦иди
•* SJ :Ш
¦Ни
ШКкшлтл
v'%
эдн
ill:
1ШИ
Weijw&ffgm' ¦v*wap
КЯЙШ
А.
пМВТ|пШ1'гТг
ШДй^Ш
Рис. 11.25. Микрофотография меристематической клетки кончика корня Zea
tnais, полученная в РЭМ [382].
Образец обрабатывался лигатурой осмия, обезвоживался и заливался в смолу-
мономер, разломан в замороженной смоле, промыт в ацетоне и высушен в
критической точке; без нанесения покрытия; метка составляет 2 мкм.
Количество тяжелого металла в образце может быть существенно увеличено
путем добавления лигандсвязывающего агента, который увеличивает осаждение
тяжелых металлов в образце. Впервые этот метод был предложен в работе
Предыдущая << 1 .. 91 92 93 94 95 96 < 97 > 98 99 100 101 102 103 .. 139 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed