Успехи огранической химии, Том 1 - Рафаэль Р.
Скачать (прямая ссылка):
+ I
4-
t Связи, расщепляемые і в первую очередь
t Прочие расщепляемые ( связи
Рис. 1. Порядок расположения аминокислот в цепи А окисленного инсу
Связи, расщепляемые
NH2NH2
1 I
Н. Фе. Вал. Асп. Глу. Гис. Лей. UhSO3H. Гли. Сер. Гис. Лей. Вал. Глу.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
трипсином химотрипсином
пепсином
плесневой протеазой
субтилизином
ренннном
^ Связи, расщепляемые в первую очередь
Прочие расщепляемые связи
Рис. 2. Порядок расположения аминокислот в цепи Б окисленного
NH2
NH,
NH2 I
Ала. Сер.Вал. UhSO3H. Сер. Лей. Тир. Глу. Лей. Глу. Асп. Тир. UnSO3H. Асп. ОН
8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
t
I
T t
T t
I I і І
лина быка н связи в нем, гидролизуемые протеолитическимн ферментами.
Ала. Лей. Тнр. Лей. Вал. UhSO3H. Г лн. Глу. Apr. Г лн. Фе. Фе. Тир. Тре. Про. Лнз. Ала. ОН
14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
t "г t і
t t
t I
инсулина и. связи В нем, Гидролизуемые протеолитическимн ферментами.
186
Селективное расщепление белков
NH2 I
Н. Гис. Сер. Глу. Глн. Тре. Фе. Тре. Сер. Асп. Тир. Сер. Лиз.
12 3 4 6 6 7 8 9 10 11 12
трипсином
химотрипснном
субтилизином
T Связи, расщепляемые T Прочие расщепляемые
1 в первую очередь І свяаи
Рис. 3. Порядок расположения аминокислот в глюкагоне и связи
расщепляется в большей степени (на 70%), чем аргинилала-нильная связь (на 20%) [44]. Если бы аргиниларгинильная связь разрывалась раньше аргинилаланильной связи, то следовало бы ожидать подавления гидролиза аргинилаланильной связи вследствие образования свободной а-аминогруппы. Однако имеющиеся данные свидетельствуют о медленном разрыве этой связи; 80% свободного аргинина образуется через 50 час при 25° и pH 7,8. -
Кроме того, разрываются и другие связи, в том числе связи ароматических аминокислот. Разрыв этих связей затрудняет фракционирование гидролизата, и в настоящее время не установлено, обусловлен ли гидролиз ароматических аминокислотных остатков специфической активностью трипсина или наличием примеси другой протеазы, например химо-трипсина. В этой связи представляет интерес сообщение [210] о химотриптической активности, свойственной трипсину. Эти данные подтверждаются.близостью химического состава и последовательностью расположения аминокислот в пептидах, выделенных из прилегающих к активным центрам трипсина и химотрипсина участков и содержащих диизопропилфосфат-ный остаток ингибитора — диизопропилфторфосфата [225]. Возможность загрязнения ферментного препарата химотрипснном не была исключена, но все связи, на которые действует химотрипсин, не расщеплялись, а введение в реакционную смесь ?-фенилпропионата — ингибитора химотрипсина — не предотвращало разрыва связей в положениях 6—7 и 25—26, о которых идет речь. К сожалению, из опубликованного сообщения не ясно, проводилось ли термостатирование- фермента -
вязи, расщепляемые
Реагенты, расщепляющие связи в полипептидной цепи
187
NH2 NH2 NH2
I I I
Тнр. Лей. Асп. Сер. Apr. Apr. Ала. Глу. Асп. Фе. Вал. Глу. Три. Лей. Мет. Аса Тре. ОН
13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29
в нем, гидролизуемые протеолитнческими ферментами.
в присутствии ингибитора до введения субстрата. Если этого не было сделано, то нельзя считать, что химотрипсин удалось полностью ин активировать. - і
Вазопрессин. Вазопрессин содержит одну аминокислоту основного характера, которая в вазопрессине быка (XII) представляет собой аргинин, а в гормоне свиньи — лизин. Трипсин в обоих случаях вызывает выделение глициламида [83]. Некоторый интерес представляет тот факт, что в вазо-
NH2 NH2
Ы. Цис. Тир. Фе. Глу. Асп. Цис. Про. Apr. Г ли. NH2 I I ^_
O_ о Трипсин
XII
прессине, как и в инсулине, перед основной группой в цепи находится пролильный остаток, который не ингибирует фермент, в то время как разрыв лизилпролильной или аргинил-пролильной связи подавляется (см. табл. 1). В кортикотро-пине, рассмотренном ниже, лизилпролильная и аргинилпро* лильная связи оказались устойчивыми.
Окисленная рибонуклеаза. Молекула рибонуклеази содержит десять остатков лизина и четыре остатка аргинина [153]. При количественном разрыве всех связей, в которых участвуют карбоксильные группы указанных аминокислот, под действием трипсина следует ожидать образования пятнадцати
Н. Лиз. Глу. Тре. Ала. Ала. Ала. Лиз. Фе. Глу. Apr. Сер. Тре. Ce Связи, расщепляемые і 2 з 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
t t
трипсином I I
химотрипсином ' I
пепсином ! I
NH2
-Мет. Лиз. Сер. Apr. Асп. Лей. Тре. Лиз. Асп. Apr. UhSO3H. Лш Связи, расщепляемые зо зі 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41
