Успехи огранической химии, Том 1 - Рафаэль Р.
Скачать (прямая ссылка):
Последовательность расположения аминокислот, приведенная на рис. 4, установлена на основании данных обеих групп исследователей [9, 10, 151, 154, 155].
Кортикотропии. Последовательность расположения аминокислот в адренокортикотропном гормоне (кортикотропине) свиньи была установлена двумя группами исследователей. Они работали с исходными веществами, которые отличались только по. количеству амидных групп, поскольку во время выделения гормона возможно дезамидирование. Кортикотропии свиньи легко теряет амидные группы [79]; так, при рН9 и 25° за 18—22 час происходит дезамидирование единствен-.' ного глутаминового остатка (в положении 30 на рис G)t а за
н. Сер. Тнр. Сар. Мет. Глу. Гис. Фе. Apr. Три. Гли. Лиз—
1 2 3 4 567 8 9 ю 11
Связи, расщепляемые
трипсином I "
химотрипсином I _ I I
пепсином
—Про. Вал. Глн. Лнз. Лиз. Apr. Apr. Про. Вал. Лиз. Вал. Тир-
12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
Связи, расщепляемые ... .
- • !
трипсином I
химотрипсином пепсином
NH2
I
—Про. Асп. Гли. Ала. Глу. Асп. Глу. Лей. Ала. Глу. Ала. Фе—
24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35
Связи, расщепляемые
трипсином
химотрипсином
пепсином
—Про. Лей. Глу. Фе. ОН
36 37 38 39
Связи, расщепляемые
трипсином
химотрипсином
пепсином
Связи, расщепляемые в первую очередь
Прочие расщепляемые связи
Рис. 6. Порядок расположения аминокислот в кортикотропине свиньи и связи в нем, гидролизуемые протеолитическимн ферментами.
Реагенты, расщепляющие связи в полипептидной цепи 193
2—3 суток дезамидирование происходит до конца, причем гормон не теряет активности [283]. Подобное дезамидирование, по-видимому, происходило при выделении Уайтом и сотр. [338] кортикотропина А. Последовательность аминокислот в кортикотропине свиньи показана на рис. 6. Единственным участком цепи, в отношении которого имеются расхождения по вопросу последовательности расположения аминокислотных остатков, является участок 25—28. Эти расхождения, возможно, вызваны техническими трудностями при расщеплении по Эдману (см. стр. 237), которое широко использовалось для изучения строения кортикотропина [284]. В одной из предложенных структур кортикотропина [341] последовательность расположения остатков 10—14 и 19—20 не указана. По-види-мому, гормональная активность кортикотропина обусловлена той частью цепи, которая ограничена аминокислотными остатками в положениях 1—24 [23, 340], поскольку частичный гидролиз кортикотропина под действием пепсина приводит к отщеплению одиннадцати остатков от С-концевого участка цепи, а при гидролизе разбавленной кислотой этого гидролизата отщепляется еще несколько остатков без потери активности.
Расщепление трипсином быстро инактивирует молекулу; необычная группировка из четырех остатков основного характера —Лиз.Лиз.Арг.Арг.Про—т приводит к появлению боль-is 16 17 18 19
шого числа продуктов распада за счет разрыва связей на этом участке. Связи —Лиз.Про— и —Арг.Про— оказались
11 12 18 19
устойчивыми к действию трипсина. Выходы пептидных осколков, выделенных методом противоточного распределения, свидетельствуют о том, что связи —Арг.Три—, —Лиз.Лиз— и
Ъ 9 15 16
—Лиз.Вал— разрываются не менее чем на 90% [284]. Частич-
21 22
ный разрыв связей —Лиз.Арг— и —Арг.Арг— происходит не
16 17 17 18
более чем на 20%, при этом образуется еще четыре пептидных осколка с выходом 10—20%. При быстром расщеплении связи —Лиз.Лиз— рядом со связью —Лиз.Арг— появляется
15 16
свободная аминогруппа, стабилизирующая эту связь по отношению к трипсину. Аналогично этому молекулы, расщепление которых протекает сначала по связи —Лиз.Арг—, в дальней-
16 17
шем лишь с трудом претерпевают расщепление по связи —Арг.Арг—.
17 18
Таким Образом, за счет расщепления молекулы кортикотропина на указанном участке удалось выделить следующие
13 Зак. 1416
194 Селективное расщепление белков
пептиды с выходом 93 вес. % (ср. с рис. 6);
90% Н. Три. Гли. Лиз. Про. Вал. Гли. Лиз. ОН
10% (макс.) Н. Три. Гли. Лиз. Про. Вал. Гли. Лнз. Лнз. ОН
70% Н. Лиз. Apr. Apr. Про. Вал. Лиз. ОН
20% (макс.) ••- -. Н. Apr. Apr. Про. Вал. Лиз. ОН
20% (макс.) - - Н. Apr. Про*. Вал. Лиз. ОН
10% (макс.) . • Н. Лиз. Apr. ОН
Вопреки ожиданиям, в гидролизате не было обнаружено свободных лизина и аргинина.
Кортикотропин овцы проявляет видовую особенность, которая заключается в том, что вместо аминокислотных остатков— ЛейАла — он содержит —Ала.Сер— [199] и, кроме того,
31 32 31 32
на участке 25—28 аминокислоты имеют иную последовательность; —Ала.Гли.Глу.Асп—." Гидролиз под действием трипсина на участке —Лиз.Лиз.Арг.Арг— кортикотропина овцы также происходит иначе: -.
