Успехи огранической химии, Том 1 - Рафаэль Р.
Скачать (прямая ссылка):
При оптимальной величине pH хймотрипсин устойчивее трипсина, но в концентрированном растворе при pH 7,8 юн претерпевает аутолиз без потери активности, превращаясь в две новые формы ^p- и -{-химотрипсины.
Исследования химотрипсина на синтетических субстратах показали, что специфичность фермента проявляется несколько шире, чем специфичность трипсина. Как правило, пептидные' связи, гидролизуемые химотрипсином, образованы карбоксильными группами аминокислот, имеющих боковые цепи ароматического характера, например тирозина, фенилаланина или триптофана. Кроме того, атаке подвергаются соединения, содержащие метионин и лейцин, но гидролиз протекает гораздо медленнее [128, 228].
НЕАКТИВНЫЕ МОЛЕКУЛЫ
АКТИВНЫЕ МОЛЕКУЛЫ
L(S-S)J
R'U63)-
Лиэ-Лей Тир Тре
ACn(NH2)
Ала / !
Acn(NH2)-R(46)-~X.OH H.uh-R"(8)-Cep Химотрипсиноген
Химотрипсин
—Гли Вал 14 Илей "Apr"
Сер
Леи J
-Гли
Трипсив
Us-S)J
-R4163)-
Лиз-
J-
Лей
Тир.ОН Н.Тре
AcIi(NH2) Ала
Ac n(NH2)-rR(46)-X. ОН H'.UH-R"l8)-Ctp Неохимотрипсиноген (-Тре)
-Гли
Вал
Сер Лей —Гли
Хииотрипснв
L-(S-S)2-I
-R'(163)
(S-S)2
Н.Илей Apr. ОН
Лиз-Лей
Тир
-I • Тре
Acn(NH,) .1
Ала ^ Ii
Acn(NHs)-R(46)-X.OH Нл'и-Р"(8)-Сер-Гли ті-Химотрипсин
Лиз-Лей Тир Тре
L(S-S)J
Химотрипсин -R'(163)-
(S-S)2
— Гли Вал Н.Илей
+-Н.Сер.Арг.ОН
Лей.ОН
Acn(NH2)
Ала f у --|
Acn(NH2)-R(46)-X.OH Н.Ци-Н"(8)-Сер-Гли
З-Химотрипсин
Хнмотрипсяв -H.Tpe.Acn(NH2).OH
Диз-Лей Тир.ОН
L(S-S)2J
-R4163) -
-Гли
Вал
Илей
. I
Apr
Сер
(S-S)2 /
+H.Tpe.Acn(NHs).Orl/ ^
Н.Ала / S " Лей
Acn(NH2)-R(46)-X.OH H.Un-R"(8)-Cepr-riH Неохимотрипсиноген (-Ала)
Лизні. Лей
Тир.ОН
L(S-S)J
Химотрипсин R'(163)-
(S-S)2
"С
Лиз-
Лей 4S-S)2 Тир.ОН
Н.Ала
-R'(163)
Н.Илей
Трипсин
Acn(NH2)-R(46)-X.OH
о-Химотрипсин -Н.Сер.Арг.ОН
Лей.ОН
R"(8)-Cep-ria
— Гли Вал Илей Apr Н.Сер
Л«й.ОН
Н.Ала
Acn(NH2)-R(46)~X.OH H.UH-R"(8)-Cep-riiH Неохимотрипсиногеи (-Ала,Сер)
Рис. 10. Химические превращения, связанные с активированием химотрипсиногена.
Цифры в скобках показывают число аминокислотных остатков на данном участке полипептидной цепи. Химотриптическая активность появляется сразу после разрыва связи — Арг.Илей— под действием трипсина. При дальнейшем действии химотрипсина образуются другие актиниые молекулы. Все неохимотрипсиногены активируются в результате расщепления трипсином связи —Арг.Илей—,но на схеме показано только активирование неохимотрипсиногеиа (Ала, Сер). Сокращения в скобках показывают, что N-концевыми остатками являются аланин и серия, и позволяют отличать различные неохимотрипсиногены.
202
Селективное расщепление белков
Химотрипсин использовался для гидролиза полипептидов и белков до выделения пептидов с целью изучения последовательности аминокислот. Полученные до настоящего времени данные о том, какие типы связей подвергаются разрыву под
Таблица 2
Действие химотрипсина на различные белки
Пептид или белок
Связи остатков тирозина, фенилаланииа и триптофана
Другие расщепляемые связи
легко расщепляемые
частично расщепляемые
устойчивые
Окислен-
ный
инсулин цель А
Тир. Глу (NH2) 14 15
Тир. Ци SO8H 19 20'
Пи SO3H. Сер 11 12
цепь Б
Фе. Тир 25 26
Тир. Лей 16 17
Лей-. Тир 15 16
ф?. Фе
24 25
•
Три. TpL- • 26 27
»
Глюкагон
Фе. Тре
6 7 Фе. Вал
22 23 Три. Лей
25 26
Тир. Сер 10 11
Тир. Лей 13 14
Окисленная рибонуклеаза
Фе. Глу 8 9 Фе. ? 46 47 Фе. Асп 120 121
Тир. Ци SO8H
25 26 Тир. Глу (NH2)
73 74 Тир. Сер
76 77 Тир. Лиз
97 98 Тир:- ?
115 116
Тир. Про
92 93
Глу. Ала
18 19 Лей. Тре
35 36 Асп (NH2). Вал
62 63 Мет. Сер
79 80
Глу (NH2). Лиз 103 104
Гис. Илей или Вал 105 106
Кортикотропин
Фе. Apr 7 8
Три. Гли 9 10
Тир. Сер 2 3
ТЩ. Про 23 24 Фе. Про
35. 36
Лиз. Лиз 15 16
Лей. Глу 37 38
tt-МСГ
Фе. A^r
Тир. Сер
2 3
Три. Гли
9 10
-
6-МСГ
.Фе. Apr
к) ;н
Три. Гли Тир. Лиз 12 13 5 6
Гипертен-
Фе. Гис
Тир. Вал
син
8 9
4 5
действием этого фермента (Табл..2), подтверждают, что обычно происходит разрыв связей, в которых участвуют остатки фенилаланииа и тирозина, но иногда именно эти связи оказываются устойчивыми, а разрываются другие типы связей-
Реагенты, расщепляющие связи в полипептидной цепи 203
При активировании химотрипсиногена трипсином, в ходе которого наблюдается также аутолиз-или действие химотрип-сина на . химотрипсиноген, помимо ожидаемого гидролиза связи —Тир.Тре— происходит разрыв связей —Лей.Сер— и —Асп(ЫНг).Ала—, т. е. связей, образованных остатками, Не содержащими боковых цепей ароматического характера. Таким образом, связь —Тир.Тре— представляет собой единственную связь, в которой участвует аминокислота с ароматическим заместителем в боковой цепи, хотя белок содержит четыре остатка тирозина, шесть остатков фенилаланина и шесть остатков триптофана. Это является еще одним доказательством устойчивости нативного белка к ферментативному гидролизу. ...
