Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Рафаэль Р. -> "Успехи огранической химии, Том 1" -> 72

Успехи огранической химии, Том 1 - Рафаэль Р.

Рафаэль Р., Тейлор Э., Уайнберг Г. Успехи огранической химии, Том 1. Под редакцией Кнунянца И.Л. — М.: Издательство иностранной литературы, 1963. — 397 c.
Скачать (прямая ссылка): uoc1.djv
Предыдущая << 1 .. 66 67 68 69 70 71 < 72 > 73 74 75 76 77 78 .. 136 >> Следующая


Молекулярный вес папаина равен примерно 20500; его молекула содержит Приблизительно 180 остатков аминокислот, но при инкубированиислейцинаминопептидазойот N-koh-цевого участка цепи папаина отщепляется до двух третей остатков аминокислот без потери исходной ферментной активности [148].

Максимальная активность папаина проявляется при pH 5—7,5; при более высоких значениях pH возможны химические превращения и реакции переноса [117, 178].

Установлено [27], что частично очищенный папаин способен атаковать синтетические субстраты амидного и пептидного типа. Аналогичными свойствами обладает и кристаллический фермент [178], который вызывает расщепление, хотя и с весьма различными скоростями, всех синтетических субстратов для трипсина, пепсина, химотрипсина, карбоксипепти-дазы и пептидаз. Из известных в настоящее время субстратов папаина наиболее чувствительным оказался бензоил-/-арги-ниламид. Атака фермента иа фракцию А окисленного инсулина свидетельствует о широком спектре гидролитического действия» напоминающем действие пепсина, хотя степень разрыва различных связей этими ферментами весьма различна.

Связи, атакуемые папаином, показаны на рис. 1. Представляет интерес тот факт, что в незатронутой фракции А

Реагенты, расщепляющие связи в полипептидной цепи 211

расщепляется связь —ЦиБОзН.Сер — , а в пептидном осколке,

11 12

состоящем из остатков 1—13 этой цепи, вместо этой связи разрывается связь —Сер.Вал—. Это также показывает, что

9 10

разрыв чувствительной к гидролизу связи определяется не только характером остатков, участвующих в образовании связи, но и другими факторами.

Протеаза плесени и субтилизин. Протеаза плесени, выделенная в кристаллическом виде из фильтратов культуры А. огу-гае, оказалась во много раз активнее папаина при гидролизе казеина и гемоглобина [66]. Найдено, что этот фермент приводит к более глубокому гидролизу цепей окисленного инсулина, чем все рассмотренные выше ферменты [269]. Связи, разрываемые протеазой плесени, показаны на рис. 1 и 2.

Субтилизин был получен в кристаллическом виде Гунтле-бергом и Оттезеном [130] из среды, в которой выращивался штамм В. subtilis. Первоначально этот протеолитический фермент был обнаружен по его способности вызывать ограниченный гидролиз нативного овальбумина, сопровождающийся образованием другого способного кристаллизоваться белка — плакальбумина [200] — и гексапептида Ала.Гли.Вал.Асп.Ала. Ала [231].

Специфичность разрыва этой связи весьма примечательна, если учесть разнообразие пептидных связей, разрываемых этим ферментом в других белковых соединениях. Вообще субтилизин характеризуется таким же широким диапазоном специфичности, как и плесневая протеаза. Оба фермента при кристаллизации выпадают в виде кристаллов одинаковой формы, но они имеют разные изоэлектрические точки [130], поэтому их вряд ли можно считать идентичными.

Окисленный окситоцин (XIII) расщепляется субтилизином по указанным ниже связям [326]:

Н.Ци803Н.Тир!!Илей.Глу(КН2).Аеп (NH2) —

¦ 1 1

Ци803Н.Про.Лей.Глу.НН2

T

XIII

В цепи Б окисленного инсулина (см. рис. 2) из 29 связей субтилизин гидролизует 18 связей [324], а в природном инсулине свиньи [213] в цепи Б гидролизуется только 13 связей, что свидетельствует о влиянии структурных факторов на ход

14*

NH5S-S NH5 NH, NH2

H. Гли. Илей. Вал.Глу. Глу. Ци.Ци.Тре.Сер. Илей. Ци. Сер. Лей. Тир. Глу. Лей. Глу. Асп.Тир.Ци. Асп. ОН

• t |t " t f .. M ti

I

NH8NH, S j

НіФе.Вм^\сп.Глу.Гис.Лей.'Ци.Г^Сер.Гис.Лей^

MtIItMf tit t

Рис. 11. Порядок расположения аминокислот в инсулине свиньи и связи в нем, гидролизуемые

субтилизином.

Реагенты, расщепляющие связи в полипептидной цепи 213

протеолиза. Связи, разрываемые субтилизином в инсулине свиньи, показаны На рис. 11, а соответствующие связи глю-кагона — на рис. 3. В обзоре Анфинзена и Редфилда [10] приводятся имеющиеся данные по действию субтилизина на рибонуклеазу.

Вряд ли имеет смысл делать какие-либо обобщения, касающиеся специфичности этого фермента. В случае инсулина наблюдается избирательное действие на связи, образованные карбоксильной группой лейцина, тогда как в отношении глю-кагона это не ясно [287]. Поэтому создается впечатление, что в образовании гидролизуемых субтилизином связей могут принимать участие все аминокислотные остатки, за исключением, по-видимому, пролина.

Легочная протеиназа I и реннин. Очищенная протеиназа, выделенная из легкого быка, разрывает в цепи Б окисленного инсулина те же связи, что и пепсин [67]. Синтетические субстраты для легочной протеиназы до сих пор не найдены.

Изучено также действие кристаллического реннина на окисленный инсулин [103]. Найдено, что он гидролизует некоторые связи, атакуемые пепсином. В условиях, в которых исключена возможность загрязнения препарата реннина пепсином, было установлено, какие связи разрывает этот фермент (см. рис. 2).

Тромбин. Превращение фибриногена в фибрин под действием тромбина является примером ограниченного протеолиза, затрагивающего только две или три связи примерно из 3000 связей фибрина и приводящего к образованию двух полипептидов, которые были охарактеризованы [18, 30]. Оба полипептида содержат аргинин. Поскольку тромбин гидролизует синтетические субстраты, например метиловый эфир то-луолсульфонил-/-аргинина [285], был сделан вывод, что в фибриногене происходит расщепление аргинильных связей. Однако лизин в одном из-пептидов может участвовать в образовании разрываемой связи, так как субстратами тромбина являются как этиловый эфир лизина, так и лизилаланиновая связь в цепи Б окисленного инсулина [95]. Протеолитического действия тромбина на овальбумин и миозин кролика не было обнаружено [18].
Предыдущая << 1 .. 66 67 68 69 70 71 < 72 > 73 74 75 76 77 78 .. 136 >> Следующая
Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed