Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Рафаэль Р. -> "Успехи огранической химии, Том 1" -> 76

Успехи огранической химии, Том 1 - Рафаэль Р.

Рафаэль Р., Тейлор Э., Уайнберг Г. Успехи огранической химии, Том 1. Под редакцией Кнунянца И.Л. — М.: Издательство иностранной литературы, 1963. — 397 c.
Скачать (прямая ссылка): uoc1.djv
Предыдущая << 1 .. 70 71 72 73 74 75 < 76 > 77 78 79 80 81 82 .. 136 >> Следующая


Помимо того, что перегруппировка происходит неколичественно, недостатком миграции ацильной группы от N к О как предварительного этапа исследования строения пептидов является изменение некоторых аминокислот глиадина под действием серной кислоты [247]. Изменения претерпевают амидные группы, метионин, аргинин, тирозин, фенилаланин и цистин.

Помимо краткого сообщения о фракционировании продуктов расщепления лизоцима [97, стр. 139], обработанного серной кислотой, методом ионофореза известен только один случай, когда полученную таким методом пептидную фракцию

222

Селективное расщепление белков

удалось охарактеризовать после выделения (фиброин шелка). После обработки химотрипсином был получен остаток, состоявший в основном из остатков серина, глицина и аланина и небольшого количества остатков тирозина [81]; этот остаток соответствовал 60% исходного фиброина. Затем остаток обрабатывали при 27° серной или, что лучше, фосфорной кислотой (содержащей фосфорный ангидрид, чтобы кислота оставалась безводной) при 40°, охлаждали, разбавляли и вводили в реакцию с ДНФБ при значении pH, которое ступенчато повышали примерно до 9. В ходе такой обработки сложноэфирные связи гидролизовались и освобожденные аминогруппы переводились в ДНФ-производные. Из растворимых в воде ДНФ-пептидов была выделена и охарактеризована фракция ДНФ-Сер.Гли.Ала.Гли.Ала.Гли.ОН, которая по весу соответствовала 36% остатка после гидролиза под действием химотрипсина. Эта фракция представляет собой периодически повторяющееся звено в молекуле фиброина [207].

О возможности миграции ацильной группы в разбавленных водных растворах кислот высказывались различные предположения. Тенфорд [308] изучал кривые титрования нескольких подробно охарактеризованных белков (инсулин, рибонуклеаза, лизоцим, ?-лактоглобулин, овальбумин и альбумин сыворотки крови человека). Он установил, что по крайней мере для указанных белков отсутствуют данные, свидетельствующие об увеличении количества аминогрупп при pH 2 — самом низком значении, достигнутом в ходе титрования. Приведенные выше данные показывают, что перегруппировка легче происходит в концентрированных водных растворах кислот.

В случае применения безводных органических растворителей, содержащих кислоту, возможна миграция ацйльных групп, находящихся у определенных остатков оксиаминокис-лот. Так, при определении концевых групп по методу Эдмана (см. стр. 237—245), согласно которому производное пептида обрабатывают нитрометаном и HCl [87], уксусной кислотой и HCl [88] или диоксаном и HCl [186] для циклизации N-конце-вого остатка, установлено [2, 314], что на последующих стадиях отщепления обнаруживаются небольшие Количества N-концевых остатков серина или треонина. В одном случае это привело к неправильному выводу о последовательности аминокислотных остатков [2, 186]. Обычно исследуемое соединение обрабатывают CeH5NCS или динитрофторбензолом при pH 8,5. Если же белок находится в среде с такой величиной pH до добавления реагента, то свободные аминогруппы, появляющиеся в результате миграции ацильной группы от NkO, вновь образуют пептидные связи. Предварительную

Реагенты, расщепляющие связи в полипептидной цепи 223

обработку щелочью следует считать нужной мерой предосторожности при ступенчатом расщеплении в тех случаях, когда миграция ацильной группы может явиться осложняющим фактором.

Кроухолл и Эллиот [65] изучали возможность использования хлористого водорода в абсолютном метаноле или в нитро-метане в качестве агента, вызывающего миграцию ацильной группы от N к О в простых пептидах. Ни в одном случае перегруппировка не была количественной и сопровождалась побочными реакциями. Ни дымящая серная кислота в нитро-метане, ни ледяная уксусная кислота при 100° не вызывали появления аминного азота. Как показал Бейли [14], мета-нольные растворы HCl или BF3 также не пригодны, но перегруппировку простых пептидов на 80% удалось осуществить, действуя на них смесями BF3 или SnCl4 с муравьиной или уксусной кислотой в течение 1—4 час при 60—80°. Более высокие выходы (85—90%) были получены через промежуточные циклические соединения — оксазолины (XVII), образующиеся при действии хлорокиси фосфора в течение 3 час при комнатной температуре; оксазолины размыкаются в присутствии воды или разбавленной кислоты.

При действии аналогичного реагента (POCl2F) на инсулин 50% связей серина и треонина претерпевают ацильную перегруппировку. В случае этерифицированного инсулина перегруппировка происходит почти количественно, о чем можно судить по содержанию аминного азота [13].

Установлено [56, 57, 216], что при этерификации белков О;I н. раствором HCl в метаноле увеличивается содержание аминного/азота, яо в щелочной среде вследствие обратной ацильной перегруппировки содержание аминного азота падает. В инсулине [56] наименее устойчивым остатком оказался остаток треонина.

Другим примером миграции ацильной группы от N к О под влиянием безводного кислотного реагента Является обратимое инактивирование лизоцима безводной муравьиной кислотой при комнатной температуре [167]. В этом случае ход перегруппировки контролировался путем определения содержания аминного азота и измерения активности фермента. Полное инактивирование наступало через 16 час. Помимо увеличения содержания аминного азота изменение белка выразилось также в появлении повышенного суммарного положительного заряда, что сказалось на подвижности молекулы белка при ионофорезе. В водной среде при pH 8,5 происходили Обратные изменения; при pH 7,5 обращение было нет полным, если судить по ионофорезу и поглощению щелочи,
Предыдущая << 1 .. 70 71 72 73 74 75 < 76 > 77 78 79 80 81 82 .. 136 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed