Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Рафаэль Р. -> "Успехи огранической химии, Том 1" -> 82

Успехи огранической химии, Том 1 - Рафаэль Р.

Рафаэль Р., Тейлор Э., Уайнберг Г. Успехи огранической химии, Том 1. Под редакцией Кнунянца И.Л. — М.: Издательство иностранной литературы, 1963. — 397 c.
Скачать (прямая ссылка): uoc1.djv
Предыдущая << 1 .. 76 77 78 79 80 81 < 82 > 83 84 85 86 87 88 .. 136 >> Следующая


установлена ранее для N-концевых участков. Денатурация альбумина человека 8 M раствором солянокислой соли гуа-нидина в течение 24 час при pH 8,5 не повышает гидролизуе-мость данного субстрата по сравнению с натнвным белком.

Окситоцин лейцинаминопептидазой гидролизуется довольно медленно, что, возможно, обусловлено наличием N-конце-вого полуцистинового остатка, поскольку гипертенсин [98J (см. рис. 9) примерно такого же молекулярного веса быстро расщепляется до аминокислот. Глюкагон (см. рис. 3) — полипептид с открытой цепью — также полностью гидролизуется до свободных аминокислот [149].

Полное расщепление субстратов этим ферментом свидетельствует о /-конфигурации всех аминокислот, входящих в состав субстрата, так как фермент не отщепляет аминокислот d-конфигурации.

Примером наиболее полного расщепления белковой цепи при действии лейцинаминопептидазы является гидролиз меркурипапаина. При низких концентрациях фермента первые девятнадцать аминокислотных остатков отщепляются за 24 час в примерно стехиометрических количествах. Реакция, по-видимому, прекращается тогда, когда остаток аргинина становится N-концевым. При более высоких соотношениях фермент/субстрат расщепление происходит в большей степени, пока 2/3 белка не расщепится до свободных аминокислот. Белковый остаток после активации полностью сохраняет активность (в расчете на 1 моль) по отношению к бензо-иларгиниламиду. Это свидетельствует о том, что активный центр молекулы находится на С-концевом участке цепи.

ДанньиГоб аминокислотах, отщепляющихся при глубоком гидролизе меркурипапаина, до сих пор отсутствуют, однако известий! что среди первых девятнадцати остатков нет про-ЛйНа, Присутствие свободного пролина в гидролизатах представляет интерес в связи с наблюдениями Ли и сотр. [121] о действии лейцинаминопептидазы на субстраты известного строения, содержащие пролин. Они нашли, что при инкубировании с ферментом меланофоростимулирующих гормонов быка и свиньи (см. рис. 8) из бычьего гормона, N-конце-вой участок которого имеет строение Н.Асп.Глу.Гли.Про—, Выделяется большее количество аспарагиновой кислоты (1,0 моль), чем из меланофоростимулирующего гормона свиньи (0,43 моля), имеющего последовательность аминокислотных остатков Н.Асп.Сер.Гли.Про—. От меланофоростимулирующего гормона быка глицин отщепляется лишь в небольших количествах, а от гормона свиньи совсем не отщепляется, что свидетельствует о влиянии различных

238

Селективное расщепление белков

соседних аминокислот на скорость отщепления одних и тех же N-концевых остатков. Низкое содержание глицина в обоих гидролизатах объясняется влиянием соседних остатков про-лина. Это предположение, которое не согласуется с фактом полного гидролитического расщепления гипертенсина (см. рис. 9), подтверждается только данными об отщеплении ва-лина от пептида с N-коицевым участком Н.Вал.Тир.Про-— в результате гидролиза в течение 24 час. Однако при отщеплении валйна и тирозина по методу Эдмана N-концевым становится остаток пролина, который отщепляется лейцинами-нопептидазой. N-Концевой пролин в протаминах также отщепляется [7]. Окисленный надмуравьиной кислотой пролак-тин с N-концевьш участком Н.Тре.Про.Вал— не отщепляет аминокислот под действием фермента.

В связи с повышенной гидролизуемостью развернутых белковых молекул представляет интерес то, что лейцинами-нопептидаза сохраняет некоторую активность в 8 M растворе мочевины и 6 M растворе ацетамида и что происходящее инактивирование имеет полностью обратимый характер. Однако в растворах хлоргидрата гуанидина инактивирование протекает быстро и необратимо.

Химические методы

В настоящем разделе рассматриваются только те методы, которые обеспечивают ступенчатое отщепление аминокислотных остатков, так что пептидная цепь после отщепления концевого остатка остается незатронутой. Таким образом, из рассмотрения исключается 2,4-динитрофторбензольный метод, предложенный Сэнджером [262]. Этот метод, использовавшийся для получения большей части сведений о N-концевых группах пептидов и белков, подробно рассмотрен в ряде обзоров [114, 277, 320]. Не рассматривается также метод расщепления гидразином Акабори и сотр. [3, 4, 230], позволяющий определять С-концевые аминокислоты. Этот метод в последнее время был усовершенствован [39], так что он стал пригоден для идентификации всех обычно встречающихся аминокислот.

Совершенно ясно, что требованиями, предъявляемыми к любому методу ступенчатого отщепления концевых групп, являются высокий выход продукта отщепления на каждой стадии и отсутствие одновременного расщепления других пептидных связей. Рассмотрение наиболее удачного метода отщепления концевых групп — метода Эдмана — приводит к выводу, что оптимальные условия расщепления еще оконча-

Реагенты, деЛекТибНО отщепляющие коНцвШё остатки

23?

тельно не установлены. Метод более пригоден для отщепления концевых групп пептидов, выделенных из белковых гид-" ролизатов, чем для отщепления концевых групп исходного белкового соединения. В любом случае предварительная фрагментация белковой молекулы и идентификация полученных осколков являются источником данных, необходимых для установления полной последовательности расположения аминокислот в исследуемом белке.
Предыдущая << 1 .. 76 77 78 79 80 81 < 82 > 83 84 85 86 87 88 .. 136 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed