Успехи огранической химии, Том 1 - Рафаэль Р.
Скачать (прямая ссылка):
—Лиз. Лиз. Apr. Apr. Про. Вал. Лиз. Вал ' '
15 16 17 18 19 20 Й" A ' " '¦
' - Н.Лиз. Apr.
Н. Apr. Про. Вал. Лиз. ОН ¦ Н. Лиз. Apr. Apr. ОН
Таким образом, тйдролизат не содержал пептидов с л из ил-лизильной связью, а также пептидов с N-концевым аргинил-аргинильным остатком, но пептид с С-концевой аргиниларги-нильной группой был найден. Присутствия пептида Н.Про. ВалЛиз.ОН не было установлено, хотя выделение пептида Н.Лиз.Арг.Арг.ОН свидетельствует о разрыве связи —Apr.
18
Про—. Условия гидролиза кортикотропина овцы "(рН9,3, 38е, їв
6 час) отличались от условий, в которых гидролизовался кортикотропин свиньи (pH 7,8—9,0, 25°, 4 час), но это обстоятельство не может объяснить совершенно иного хода гидролиза, гормона трипсином. Возможно, что причиной этого являются реакции транспептидирования [193, 333], как и в случае полилизина (см. стр. 181—183).
Меланофоростимулирующие гормоны. Кортикотропин по-.мимо кортикотропной активности обладает также меланофо-ростимулйрующей активностью, равной примерно Vioo активности чистого меланофоростимулирующего гормона (МСГ), выделенного из гипофиза свиньи [120, 192, 198]. Гипофиз ісвиньи содержит два активных . меланофоростимулирующих
Реагенты, расщепляющие связи в полипептидной цепи
195
гормона. Основной компонент гормона (а-МСГ) [192] и второй компонент (?-МСГ) [25, 120, 192, 244] были выделены в
R. Сер. Тир. Сер. Мет. Глу. Гис. Фе. Apr. Три. Гли. Лиз. Про. Вал. NH2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Il 12 13
Связи, расщепляемые
' t
трипсином I . " "
химотрипсином
Связи, расщепляемые
первую очередь
і связи
P н с. 7. Порядок расположения аминокислот в а-МСГ и связи в нем, гидролизуемые трипсином и химотрипсином.
чистом виде. Последовательность аминокислот в а-МСГ [139] и р-МСГ [І20, 142] была определена на очень небольших количествах вещества.
Н. Асп. Глу. Глн. Про. Тир. Лиз. Мет. Глу. Гнс. Фе. Apr —
1 23456 7 8 9 10 11
Связи, расщепляемые
трипсином химотрипсином
Связи расщепляемые
трипсином химотрипсином
¦ Три. Гли. Сер. Про. Про. Лиз. Асп. ОН
12 13 14 15 16 17 is
t
и,
т і
T Связи, расщепляемые f Прочие расщепляемые в первую очередь
связи
Рис. 8. Порядок расположения аминокислот в ?-МСГ и связи в нем, гидролизуемые трипсином и химотрипсином.
а-МСГ (рис. 7) имеет тот же порядок расположения первых тринадцати аминокислот N-концевого участка цепи, что и кортикотропин, но его а-аминогруппа содержит неизвестный
13*
196
Селективное расщепление белков
заместитель. Кроме того, а-МОГ имеет С-концевую амидную группу. ?-МСГ (рис. 8) характеризуется такой же последовательностью аминокислот в положениях 7—13, как а-МСГ и кортикотропин в положениях 4—10, но имеет другую последовательность расположения аминокислот на N- и С-конце-вых участках цепи.
Гидролиз а-МСГ под действием трипсина дал только два осколка [139], соответствующих разрыву связи —Apr.Три—.
8 9
Как и в случае кортикотропина, связь —Лиз.Про— оказалась
11 12
устойчивой.
Из ?-МСГ под действием трипсина образовалось три осколка [120, 142], при этом связь —Лиз.Асп.ОН оказалась устойчивой. Выход всех пептидных осколков превышал 80%. Поскольку в инсулине С-концевая связь —Лиз.Ала.ОН разрывалась трипсином, устойчивость связи —Лиз.Асп.ОН в ?-МСГ, по-видимому, обусловлена комбинированным эффектом а- и f-карбоксильных групп аспарагиновой кислоты, так как в обоих случаях перед указанными С-концевыми группами находится пролильный остаток. Установлено [241], что ли-зиновая связь устойчива в Н.Тир.Лиз.Глу.ОН, но не в Н.Тир.Лиз.Глу.Тир.ОН. В рибонуклеазе (рис. 4) связи —Арг.Глу— и —Лиз.Асп— легко разрывались.
85 86 37 38
Гипертенсии. При действии реннина на белок сыворотки крови образуется несколько веществ, повышающих кровяное давление [236, 279, 291]. Порядок расположения аминокислот
Н. Асп. Apr. Вал. Тир. Вал. Гнс. Про. Фе. Гис. Лей. ОН
1 23456789 10
Связи, расщепляемые
. T
трипсином I
t - . t
химотрипсином I I
Рис. 9. Порядок расположения аминокислот в гнпертенсине и связи в нем, гидролизуемые трипсином н химотрипсином.
в основном компоненте, получаемом из сыворотки крови быка, — гнпертенсине I, который является декапептидом [98], Показан на рис. 9.
Аналогичная последовательность аминокислот, но с изо-лейцином вместо валина, была установлена для декапвптида,
Реагенты, расщепляющие связи в полипептидной цепи
197
выделенного из сыворотки крови лошади [292]. Этот декапеп-тид под действием присутствующего в плазме крови фермента отщепляет гистидиниллейцин от С-концевого участка и превращается в октапептид гипертенсин II.
Трипсин, как этого следовало ожидать на основании данных о его специфичности действия, разрывает в молекуле связь — Арг.Вал— .
Другие белки. При изучении последовательности расположения аминокислот в других белках с помощью гидролиза трипсином получены результаты, которые согласуются с имеющимися данными о специфичности действия трипсина. Однако в тех случаях, когда точное расположение аминокислот в исследуемом веществе неизвестно, влияние последовательности аминокислот на гидролиз данного белкового соединения трипсином оценить не удается.
