Успехи огранической химии, Том 1 - Рафаэль Р.
Скачать (прямая ссылка):
I
NH •
\
CH-CH2-CH2-Ch2-CH2-NH-C-NH2
¦'¦ / Il
.СО NH
' I
x
NH
\
CH-CH2-S-CH2-CH2-NH2
/ со I
XI
Положительно заряженная свободная аминогруппа в а-по-ложенин в некоторых случаях способна помешать гидролизу, в других же случаях этого не происходит (см. ниже и стр. 183, 186, 187, 190). Результаты исследований на синтетических субстратах показывают, что при наличии положительно заряженной а-аминогруппы или отрицательного заряда рядом с чувствительной к гидролизу связью разрыв связи^ррипсином замедляется.
Гидролиз полилизина под действием трипсина [332] является примером влияния а-аминогрупп и карбоксильных групп. Дилизин сравнительно устойчив к действию трипсина. Активность заметно возрастает при увеличении числа остатков лизина с трех (трилизин) до пяти (пентализин). Высшие полимеры легко гидролизуются по расположенным близко
182 ¦*' Селективное расщепление белков
к концам цепи связям с образованием дилизина и трилизина, но концевые пептидные связи во всех случаях являются относительно прочными, поэтому образуются лишь небольшие количества лизина. В последнее время Уэйли и Уотсон [333] отказались от ранее высказанной ими точки зрения, согласно
Таблица I
Действие трипсина на различные белки
Пептид или бедок
Легко расщепляемые связи
Частично расщепляемые связи
Устойчивые связи остатков лизина и аргинина
Окисленный инсулин, цепь Б Глюкагон
Вазопресснн
Окисленная рибонуклеаза
Кортикотропин f *
а-МСГ
р-мсг
Гипертенснн
Apr. Гли Лиз. Ала
22 23 29 30
Apr. Apr
• 17 18
Лиз. Тир
12 13
NH, I I
Apr. Гли1). Лнз. Гли. а)
8 9 8 9
Apr. Сер
10 11
¦NH,
Apr. Асп
33 34
Apr. Глу
85 86
Apr. Три
8 9
Apr. Трн
8 9
Apr. Три
11 12
Apr. Вал.
, j „3.
Лиз. Фе
7 8 -
Лиз. Сер
31 32
Лиз. Асп
37 38
Лиз. Асп (NH2)
61 62, а также 66 67
Лиз. Тнр
91 92
Лиз. Тре
98 99
Лиз. Гнс
104 105
Лиз. Лиз
15 16
Лиз Вал
21 22
Лйз. Мет
6 7
Apr. Ала
18 19
Apr. HhSO3H
39 40
Apr. Apr
17 І8
Лиз. Apr
16 17
H. Лиз. Глу і 23
Лиз. Про
41 42
Apr. Про3)
18 19
Лнз. Про 11 12
Лиз. Про
11 12
Лнз. Асп. ОН
17 18
') Быка. *) Свиньи. *) См. текст.
Реагенты, расщепляющие связи в полипептидной цепи
183
которой дилизин вполне устойчив к действию трипсина. При более высоких концентрациях фермента реакция происходит, но лизин и трилизин образуются по механизму транспептиди-рования (ср. [193]):
2Н. (Лиз)2. ОН —>> Н. Лиз. ОН + Н. Лиз. Лиз. Лиз. ОН
Установлено [217], что салмин, молекула которого содержит периодически повторяющиеся аргиниларгинильные группы, при гидролизе трипсином также образует свободный аргинин. Это может происходить при разрыве аргинильных связей на N-концевых участках или аргиниларгининовых связей на С-концёвых участках, которые появляются в результате гидролиза под действием трипсина. Аналогично этому при гидролизе лизоцима под действием трипсина [310] образуются свободные аргинин (0,4 моль/моль) и лизин (0,9 моль/моль), хотя в гидролизате окисленного лизоцима аргинин не был найден [311]. Свободный лизин может образоваться из N-koh-цевого лизильного остатка; по имеющимся данным, молекула лизоцима содержит аргиниларгинильные [313] и лизиларги-нильные группы [311].
В табл. 1 и на рис. 1—9 показано, какие связи расщепляются трипсином в полипептидах и белках, для которых известен порядок расположения аминокислот. Из табл. 1 видно, что, как правило, трипсин действует на различные белковые цепи так, как этого можно ожидать на основании изучения гидролиза синтетических субстратов под действием трипсина. Ниже будут рассмотрены только случаи, отклоняющиеся от общих правил.
Окисленный инсулин. Трипсин не действует на фракцию А [267] ,окисленного инсулина (рис. 1); его действие на фракцию Б [272] показано на рис. 2. Имеются данные о разрыве связи между остатками в положениях 16 и 22. При этом остатки аргинина и лизина не затрагиваются [102], но не исключена возможность загрязнения трипсина какой-либо другой протеазой. В присутствии незначительной примеси химотрип-сина может произойти разрыв тирозиллейцильной связи. На
неокисленный инсулин трипсин действует довольно медленно [49]. При низких отношениях фермент/субстрат [140] С-концевой аланин освобождается быстрее, чем гептапептил- По-видимому, при целостности дисульфидных мостиков /аргинил-глицильная связь более устойчива к действию фермента.
Глюкагон. Глюкагон (рис. 3) содержит два Находящихся рядом остатка аргинина — Apr. Apr. Ала [43]. Аргиниларги-
17 18 19
нильная связь под действием трипсина в . течение 2 час
NH3
Связи, расщепляемые • химотрипсином пепсином лапанном
плесневой протеазой
Н. Гли. Илей. Вал Глу. Глу. UhSOjH. UhSO3H.
1 2 з і .5 6 7
