Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Рафаэль Р. -> "Успехи огранической химии, Том 1" -> 69

Успехи огранической химии, Том 1 - Рафаэль Р.

Рафаэль Р., Тейлор Э., Уайнберг Г. Успехи огранической химии, Том 1. Под редакцией Кнунянца И.Л. — М.: Издательство иностранной литературы, 1963. — 397 c.
Скачать (прямая ссылка): uoc1.djv
Предыдущая << 1 .. 63 64 65 66 67 68 < 69 > 70 71 72 73 74 75 .. 136 >> Следующая


, Окисленный инсулин. Глицильная цепь окисленного инсулина содержит два остатка тирозина. Обе связи, в которых участвуют эти остатки, претерпевают гидролиз [267]. Связь —Тир.Глу (NH2)—гидролиЗуется гораздо быстрее и пол-

14 IS

нее, чем связь —Тир.ЦиБОзН—. Так, через 5 мин разрывается только связь между остатками в положении 14—15 и образуются лишь два пептида., а через 16 час из гидролизата можно выделить еще четыре компонента [143], которые образуются при разрыве связи 19—20, а также, вопреки ожиданиям, связи —ЦиБОзН.Сер— (см. рис. 1).

U 12

При частичном разрыве связей в положениях 11—12 и 19—20 состав гидролизата становится более сложным, что затрудняет последующее фракционирование. Аналогичные трудности-возникают и при частичном изменении какого-либо аминокислотного остатка цепи, Например, превращение части остатков тирозина во время окисления в хлортирозин приводит к тому, что наряду с тирозинсодержащими пептидами образуется такое же число хлортирозинпроизводных. Частичное дезамидирование при получении ряда белков [54, 55, 133] приводит к образованию параллельных рядов амидосодержащих и дезамидироваиных пептидов [269], Другой трудностью, встречающейся при работе с концевыми глутаминилпептидами, является их способность отщеплять аммиак от остатка глутамина с образованием соответствующего пироглутамил-пептида, что наблюдается в случае окисленного инсулина [267, 269] и рибонуклеазы [154]. .

Неожиданным явился раз,рыв связи —ЦиБОзН.Сер— под действием химотрипсина. В контрольных опытах с химотрипсином, который предварительно инкубировался со специфическим ингибитором — диизопропилфторфосфатом, разрыва

204

Селективное расщепление белков

связи в глицильной цепи не наблюдалось. Расщепление той же связи а-химотрипсином происходило в меньшем по размерам пептиде, содержащем остатки 1 —13 глицильной цепи, но простая модель—аммониевая соль карбоксамида N-ацетйл-Z-цистеиновой кислоты — не гидролизовалась [220].

Имеются данные [228], что наличие отрицательного заряда вблизи чувствительной к гидролизу связи может препятствовать разрыву связи химотрипсином. Однако этому противоречит расщепление связей — ЦиБОзН.Сер— и —Тир.Ци803Н—, которые имеют сильные отрицательные заряды благодаря соседней —SOJ-группе, или других связей, например —Фе.Асп— (см. табл. 2).

В фенилаланильной цепи инсулина разрыва связи рядом с N-концевым фенилаланильным остатком не происходило, что, по-видимому, .обусловлено влиянием соседней положительно заряженной группы. Можно ожидать, что гидролиз группировки —Фе.Фе.Тир— в этом полипептиде протекает

24 25 26

сложно. В основном разрывается связь 26—27, в которой участвует остаток тирозина [272]. Устойчивость С-концевой группы —Фе.Фе— в образующемся пептиде позволяет предположить, что расположенный рядом с этой связью отрицательный заряд а-карбоксильной группы замедляет гидролиз связей, которые обычно легко расщепляются.

Окисленная рибонуклеаза. Действие химотрипсина на рибонуклеазу менее специфично, чем действие на этот субстрат трипсина. Об этом свидетельствуют более низкие выходы полипептидов при разделении гидролизата методом ионообменной хроматографии [154]. В выделенных полипептидах установлено наличие 151 аминокислотного остатка, в то время как в полипептидах, полученных в результате расщепления трипсином, обнаружено всего 124 остатка. По-видимому, это объясняется тем, что некоторые участки полипептидной цепи появляются более чем в одном из пептидных обломков. О более сложном составе гидролизата можно судить по небольшим количествам примесей (как правило, не выше 15%), присутствующих в большинстве основных фракций. Эти примеси не мешали определению аминокислотного состава фракций, но их присутствие еще раз подчеркивает трудности, которые встречаются при фракционировании смесей пептидов, полученных менее специфическими методами гидролиза. Гидролизаты рибонуклеазы были получены инкубированием в течение 24 час с ферментом при pH 7. При более кратковременном инкубировании гидролизат содержал дополнительно

Реагенты, расщепляющие связи в полипептидной цепи

?05

несколько пептидов, так как происходил только частичный разрыв некоторых связей, и продукты гидролиза (пептиды) содержались в меньших, чем при полном гидролизе, количествах. Выход основных пептидов составлял 40—80%. Связи, разрываемые химотрипсином, показаны на рис. 4. Если бы какие-либо другие связи гидролизовались более чем на 10%, то в гидролизате были бы обнаружены продукты гидролиза. Например, наличие пептида примерного состава ЦиЗОзН. Глу.Асп.Мет2 с выходом около 20% следует рассматривать как доказательство частичного разрыва связи —Мет.Лиз—.

30 31

Только связь, содержащая тирозин или фенилаланин, например связь —Тир.Про—, оказалась гидролитически полно-

92 93

стью устойчивой. Расщепленные химотрипсином связи показаны в табл. 2. Разрыв 15% связей —Лиз.Фе—, возможно,

• 7 8

вызван присутствием следов трипсина в химотрипсине.

Глюкагон. При гидролизе глкжагона химотрипсином не наблюдается никаких отклонений, причем все связи разрываются не менее чем на 80% (см. рис. 3).
Предыдущая << 1 .. 63 64 65 66 67 68 < 69 > 70 71 72 73 74 75 .. 136 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed