Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка):
381
Раствор титруют 0,1 н. раствором спиртовой щелочи KOH до появления синего окрашивания. Параллельно ведут титрование контрольной пробы - 5 CMj воды, спирт, индикатор до такой же окраски. Разность в объемах щелочи опытной и контрольной колбы соответствует количеству щелочи, пошедшей на нейтрализацию аминокислот (28%) и поли-пептидов.
Если хотят раздельно определить в продуктах гидролиза азот аминокислот и пептидов, то пептиды титруют в менее плотном растворе этанола таким образом: 5 см3 того же гидролизата белка переносят в колбу, добавляют 50 CMj 40°-го спирта и несколько капель тимолфталеина.
Титруют тем же раствором щелочи, параллельно титруют содержимое контрольной колбы
Расчет раздельного содержания азота аминокислот и полипептидов проводят следующим образом: на титрование опытного образца в 90°-м спирте пошло 16,5 см3 щелочи, а в 50°-м спирте - 9,3 см3. Объем щелочи, пошедшей на титрование аминокислот обозначим через а, а полипептидов - через в, тогда получим: 9,3 см3 = в + 0,28а
16,5 см3 = а + в, отсюда 9,3 см3 = (16,5 см3 - а) + 0,28а Находят количество щелочи для аминокислот а = 10 см3, в = 6,5 см3. Затем расчет ведут на азот аминокислот и азот полипептидов с учетом навески и разведения.
Для экономии спирта можно использовать определение по микрометоду теми же реактивами и в той последовательности:
Берут микропипеткой 0,5 см"* водного гидролизата белка, добавляют 5 см3 90°-го спирта, 2 капли раствора тимолфталеина в пробирку, хорошо встряхивают.
Титруют раствор в пробирке до ясноголубой окраски 0,01 н. KOH в 90°-м спирте из микробюретки.
В качестве эталона для сравнения окраски можно использовать 0,04 M раствор хлористой меди в избытке аммиака. Емкость с аммиаком должна быть плотно закрыта.
Реактивы
Этанол (спирт этиловый, «х.ч.») 40° и 90°-й по спиртометру; тимолфталеин 0,5%-й спиртовой раствор и 0,1%-й для микрометода.
Определение небелкового азота в водной вытяжке
Определение небелкового азота можно проводить двумя путями: расчётным и аналитическим. Расчётным методом небелковый азот находится по разности в содержании общего и белкового азота, выраженных в процентах. При аналитических работах возможны следующие варианты:
/. Прямое определение небелкового азота в водной вытяжке, которое обеспечивает наибольшую точность результатов. Этот метод использу
382
ется в том случае, когда необходимо непосредственно определить содержание форм небелкового азота - аммиачную, нитратную и т.д. 2. Определение его в фильтрационных водах после осаждения белка из навески медным купоросом по Барнштейну; хлорной кислотой по Плешкову; уксуснокислым свинцом по Бертрану.
Ход анализа
На аналитических весах с помощью пробирки взять точную навеску воздушно-сухого материала в пределах 1 ± 0,0001 г и поместить в химический стакан объёмом 150 - 200 см". Если определение проводится из свежего растительного материала, берётся навеска свежего растительного материала 10 г с одновременным определением влажности. Прилить цилиндром 125 см3 дистиллированной воды, опустить в стакан палочку с резиновым наконечником.
Нагреть водяную баню до 90°С, поставить в неё стаканы с испытуемым материалом и контрольный стакан с чистой водой (125 см3) и термометром.
Экстрагирование азотистых веществ проводить в течение 30 мин при температуре в стаканах 80°С, часто помешивая палочкой. Охладить растворы до комнатной температуры в бане с холодной водой (сменить воду 2-3 раза).
Для осаждения белков прилить к раствору градуированной пипеткой 0,5 см" 4%-ГО раствора уксуснокислого свинца, хорошо размешать и дать отстояться образовавшемуся осадку несколько минут. Прибавлять реактив по 2 - 3 капли, каждый раз энергично взбалтывая палочкой, до полного осаждения белков. Если осаждение идёт медленно, оставить раствор на 1 ч.
Отфильтровать раствор через воронку диаметром 8 - 10 см со складчатым бумажным фильтром в мерную колбу на 200 CMj, промыть стакан и осадок на фильтре 4-5 раз малыми порциями дистиллированной воды, довести до метки, перемешать.
50 см" раствора взять пипеткой и перенести в колбу Кьельдаля. Осторожно нагреть до кипения, упарить объём до 5 - 7 CMJ.
Остаток раствора охладить, прилить 7 см" конц. H2SO4, продолжить озоление раствора до бесцветного. В качестве катализатора добавить на кончике пера металлический селен или др.
После окончания озоления раствор количественно перенести в мерную колбу на 200 см" и провести определение аммиачного азота по Несслеру или использовать отгон по микрокьельдалю.
Отгон аммиака в аппарате микрокьельдаль
Скорость определения азота значительно увеличивается при наличии в лаборатории аппарата микрокьельдаль (рис. 26). Аппарат имеет стационарный парообразователь, нагрев от электросети.
383
Определяемый раствор заливается через воронку во внутреннюю дистилляционную колбу, туда же добавляется щелочь (концентрированный раствор NaOH или КОН). Интенсивность отгона аммиака регулируется подачей пара. Выделяющийся аммиак, пройдя по системе охлаждения, связывается в приемнике борной кислотой, при этом образуется щелочь NH4OH, которая впоследствии оттитровывается серной кислотой точно известной нормальности.
