Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка):
374
плоды, ягоды, фрукты. При фиксации листьев допустима обработка текучим паром.
Принцип метода. При нагревании с кислотами амиды отщепляют свою амидную группу в виде аммиака, который затем учитывается путем отгона при /« 400C в титрованную кислоту:
CONH2-CH2-CH-COOH +HT OiT = COOH-CH2-CH2-COOH + NH3I
Количество амидов вычисляют, умножая найденное количество аммиака на 9,42 - для аспарагина и на 10,42 - для глютамина. Расчет на амиды носят условный характер, так как в растениях присутствуют оба амида сразу. Для высших растений пересчет обычно делается на аспарагин, а для грибов пересчет можно делать на мочевину.
Ход анализа
Навеску воздушно-сухого материала 2 - 10 г помещают в мерную колбу на 100 - 200 см3 и извлекают теплой водой t « 4O0C в течение 30 мин. Объем воды составляет 2/3 объема колбы.
Раствор охлаждают, осаждают белки, добавляя по каплям 10%-й раствор уксуснокислого свинца до полного осаждения белков. Раствор после добавления каждой капли тщательно перемешивают. Избыток свинца недопустим.
Объем раствора доводят водой до метки, перемешивают, оставляют примерно на 4 часа для созревания осадка или на ночь, затем фильтруют через рыхлый складчатый фильтр.
100 см3 фильтрата помещают в колбу на 300 CMJ С обратным холодильником, в колбу доливают серной кислоты столько, чтобы конечная концентрация была 5%, закрывают холодильник и кипятят на водяной бане 3 часа. Раствор охлаждают и осторожно нейтрализуют, добавляя малые порции сухой соды до слабокислой реакции. Нейтрализованный раствор переносят в колбу для отгона, прибавляют аммиак в кислоту известной нормальности при t = 40°С.
В качестве контроля используют фильтрат без предварительного гидролиза 5%-й кислотой, определение аммиака проводится так же.
Примечание. Определение амидного азота может быть таким же методом после осаждения белков гидратом окиси меди. т.е. использовать фильтрат после осаждения белков по Барнштейну.
Раздельное определение аспарагина и глютамина (по Кретовичу)
Ход анапиза
Белки в водной вытяжке осаждаются с помощью 4%-го раствора танина. В зависимости от растительного материала на 100 см3 вытяжки расходуется 3-6 CMj раствора танина, раствор тщательно перемешивают и оставляют на ночь на холоду для осаждения белков.
375
Раствор фильтруют и используют для раздельного определения свободного аммиака и азота амидов.
Разделение аспарагина основано на более легкой гидролизуемости глютамина по сравнению с аспарагином, который гидролизуется только в кислой среде.
100 см3 фильтрата помещают в колбу на 300 мл с обратным холодильником. Прибавляют метилрот и фосфатный буфер с pH 6,46. Буфер приливают до появления желтой окраски по индикатору.
Колбу с обратным холодильником кипятят на водяной бане в течение 1 ч. После охлаждения гидролизата в нем определяют количество аммиака. Этот аммиачный азот состоит из аммиака свободного и амидного азота глютамина, примесь азота аспарагина составляет приблизительно 2,5%. Аммиачный азот определяем отгоном, получаем Si-
Для определения аспарагина берут 50 см3 фильтрата и добавляют 30%-й раствор серной кислоты из расчета, чтобы конечная концентрация раствора составила 5% серной кислоты.
Колбу с обратным холодильником помещают в баню и при регулярном помешивании кипятят 3 часа. По окончании гидролиза охлаждают и нейтрализуют содержимое колбы сухой содой до слабокислой реакции. Методом отгона определяют содержание аммиака. Получаем сумму аммиачного азота, которую представляем: аммиак свободный + аммиак аспарагина + аммиак глютамина, т.е. Z2.
Определение свободного аммиака проводят следующим образом: 50 см3 фильтрата помещают в колбу для отгона и добавляют раствор буры в щелочи. Отгон проводят в вакууме, при 400C (с. 374 - 376), получаем Zs-
Более надежные результаты дает использование при гидролизе глютамина фосфатно-боратного буфера, а при отгоне аммиака рекомендуем пользоваться не магнезией, а щелочным раствором буры.
Количество азота выражают в мг на сухую навеску при всех трех определениях, а затем рассчитывают:
аспарагин Nмг = (Е2 - Ei) мг х 100/47, глютамин NMZ — Е2 (?2 - Ei) ~ Nмг аспарагина
Реактивы
1. Фосфатно-боратный буфер: 750 см3 0.1 M KH2PO4 (13,62 г на 1 дм3) и 250 см3 0,05 M буры (19.1 г на 1 дм3).
2. Смесь буры и NaOH: 5 г буры растворяют в 100 см" 0,5 н. NaOH, используют для отгона аммиака.
Определение аммиака. Аммиак в растениях в «свободном» состоянии находится в виде солей органических кислот: щавелевой, яблочной и т.п. Вытесняется из этих соединений слабыми щелочами и отгонку его проводят в вакууме на водяной бане при t = 35-4O0C Для количествен
376
ного определения аммиака используют фильтрат после осаждения белков или непосредственно водную вытяжку.
Принцип метода. Из раствора аммиак вытесняют слаборастворимой щелочью при низкой температуре, аммиак улавливают слабой кислотой, несвязанный избыток которой оттитровывают щелочью.. Для отгонки используют специальный прибор или колбу Вюрца с различными модификациями.
Ход анализа
В круглодонную колбу с широким горлом помещаем 100 см3 вытяжки, если раствор кислый, его нейтрализуют щелочью, можно 10%-м раствором NaOH. Колбу закрывают пробкой, в которую вставлена воронка.
