Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка):
В приемную колбу наливают 20 CMj 20%-Й борной кислоты, присоединяют ее к холодильнику, соединяют эту колбу через дефлегматор Д с водоструйным насосом.
В отгонную колбу через воронку вливают хорошо прокипяченное и охлажденное известковое или магнезиальное молоко до яснощелочной реакции по лакмусовой бумаге. Обычно используют от 2 до 10 г MgO. Воронку закрывают зажимом. Содержимое колбы перемешивают от руки.
Подключают водоструйный насос и нагревают колбу на водяной бане / = 38 - 40°С. При наличии вакуума отгон аммиака заканчивается за 30 - 40 мин. По окончании отгонки зажимают зажимом отводную трубку приемной колбы.
Осторожно открывают кран капельной воронки, выравнивают давление в обеих колбах, вынимают пробки из отгонной, а затем и из приемной колбы. Носик холодильника ополаскивают дистиллированной водой, промывные воды сбрасывают в приемную колбу.
Рис. 25. Прибор для отгонки аммиака в вакууме: А - отгонная колба, Б - приемник, Д - дефлегматор
377
Содержимое приемной колбы по индикатору тимолфталеину от-титровывают 0,1 н. раствором H2SO4. Содержание аммиака рассчитывают по формуле (см. с. 384).
Нагревание колбы на бане начинают после того, как в системе создается вакуум. В случае сильного пенообразования в отгонной колбе можно добавить 1 - 2 г чистого парафина. Если нет возможности собрать указанный прибор, то можно для отгона использовать колбу Вюрца. В пробку этой колбы должны быть вмонтированы воронка с длинным носиком и капилляр с зажимами. Отводную трубку этой колбы соединяют с другой, меньшей по объему колбой Вюрца, она служит приемником. Отводную трубку второй колбы Вюрца резиновым шлангом через предохранительную склянку соединяют с водоструйным насосом. Вторую колбу Вюрца помещают в штатив с держателем, укладывают в него большую стеклянную воронку, а затем колбу Вюрца. Колбу, таким образом, в процессе отгонки охлаждают проточной водопроводной водой.
Определение аминного азота фотометрическим методом
Принцип метода: аминокислоты переводят в растворимые медные соли. Содержание меди в растворе определяют по ферроцианиду меди [CuFe(CN)6], который при малых концентрациях дает слабо-розовую окраску. Интенсивность окраски измеряется на колориметре.
Ход анализа
Навеска воздушно-сухой массы ±0,2-0,3 г вегетативных органов или 2 г сырой биомассы растирают в фарфоровой ступке, добавляя 3 -5 см" дистиллированной воды.
Количественно переносят через стеклянную воронку в мерную колбу на 25 см\ объем раствора должен быть ~ 15 CMj. Содержимое нагревают на водяной бане 30 мин при t = 45-50°С, колбы при экстракции регулярно перемешивают.
Охлаждают экстракт, осаждают белки, для этого по каплям добавляют ~ 2 CMj 5%-ГО раствора ZnSO4. Для установления нейтральной реакции раствора и сохранения ИЭТ добавляют еще 0,5 см3 5%-го раствора NaOH, перемешивают, а полноту осаждения белков проверяют добавлением одной капли 1%-го раствора NaOH, при внесении которой экстракт не должен давать помутнения. Содержимое колбы доводят до метки водой и перемешивают.
Экстракты после осаждения белков фильтруют через стеклянные тигли или центрифугируют для отделения белков.
Берут 5 CMj прозрачного фильтрата (1) в коническую колбу на 50 CMj, добавляют 5 CMj смеси меди, реактив А, взбалтывают содержимое 10 мин. Одновременно готовят контрольную пробу, для этого вместо экстракта берут 5 см1 воды. Содержимое опытной и контрольной колб фильтруют - фильтрат (2). 378
Берут 5 CMj фильтрата (2) в мерную пробирку на 10 см3, добавляют 0,1 см3 10%-й HCl, 1 см" ферроцианида, энергично перемешивают, доводят до метки, снова перемешивают. Интенсивность окраски измеряют на колориметре. Для сравнения используют контрольный раствор, который окрашивают так же.
Построение калибровочной кривой. Исходный раствор медной соли (стандарт) разбавляют водой в 10 раз - получаем рабочий раствор. Готовят серию растворов для окрашивания, для этого в 11 пробирок вносят поочередно от 0,1 до 1 см3 рабочего раствора медной соли с интервалом 0,1 или 0,2 см3. В каждой пробирке водой доводим объем до 5 см3. Оптические плотности полученных растворов соответствуют 0,001; 0,002; 0,01 мг аммиачного азота. Окрашивание этих растворов проводится так же, как и опытных растворов. Используют синий светофильтр. При вычислении результатов анализа сначала величину оптической плотности контрольного раствора вычитают из величины плотности опытного раствора.
Содержание аминного азота в мг на 100 г в опытном образце (X)
, v a ?V1-100
рассчитывают по формуле: X = -————
V2 • H
где а - мг аминного азота по графику, V1 - общий объем экстракта при гидролизе белка (см3); V2 - объем раствора, взятого для окрашивания (см3); H - навеска материала, г.
Реактивы
1. 0,16 M раствор CuCl2: 27,3 г соли растворяют в воде, доводят объем до 1 дм".
2. Раствор натрия фосфорнокислого: 64,5 г Na2HPO4 12H2O растворяют в 0,5 дм3 воды без CO2, добавляют 7,2 г NaOH, растворяют, доводят объем до 1 дм3.
3. Боратный буфер - pH 8,9.
4. Взвесь фосфорнокислой меди (реактив А), готовят непосредственно в день определения из трех растворов (приготовление которых описано в п.п. 1 - 3), смешивая их в такой последовательности: растворы п. 1 и п. 2 смешивают в соотношении 1:2, а затем добавляют 2 объема буфера боратного (п. 3).
