Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Аберкромби Д. -> "Аффинная хроматография" -> 55

Аффинная хроматография - Аберкромби Д.

Аберкромби Д., Алленмарк С, Арамэ С, Бара-бино Р. Аффинная хроматография — М.:Мир, 1988. — 278 c.
ISBN 5-03-000480-7
Скачать (прямая ссылка): affinnayahromotograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 49 50 51 52 53 54 < 55 > 56 57 58 59 60 61 .. 106 >> Следующая

расщепления не наблюдается полное частичное
{нет пиков при элюировании)
удерживание уменьшают путем добавления в подвижную фазу Ъ% 1-пропанола
изменяют pH подвижной фазы на 1,5 единицы ниже или выше 7,0
удерживание: расщепление
приемлемое полное частичное нет
Рис. 3. Общая стратегия оптимального расщепления оптически активных соединений.
2.9.5. Экспериментальные методики для оптического расщепления.
1) Предварительные эксперименты по расщеплению и методики оптимизации процессов. Несмотря на то что ВЭЖХ на колонках с БСА-силикагелем никогда не станет универсальным методом оптического расщепления рацематов органических соединений, оказалось, что с помощью этого метода удалось разделить на энантиомеры (полностью или частично) неожиданно много соединений различных типов. В настоящее время мало что известно о взаимосвязи молекулярной структуры рацемического соединения с его энантиомерной избирательностью при связывании с БСА. По опыту авторов перспективными для таких экспериментов являются соединения, содержащие ароматические или полярные заместители (например, амидные, сложно-эфирные, кето-, карбоксильные или сульфоксидные группы). Сильное удерживание на колонке не обязательно приводит к оптическому расщеплению [которое часто обусловлено преобла-
Лиганды для иммобилизации
147
данием одного из взаимодействий [16]]; в случае некоторых быстро элюируемых соединений наблюдается полное разделение на оптические изомеры, в то время как многие сильно удерживаемые вещества не удалось разделить вовсе.
Для установления возможности расщепления конкретной рацемической смеси лучше всего прибегнуть к методике, схема которой изображена на рис. 3. Не следует использовать концентрации 1-пропанола выше 7%, что обычно и не требуется, за исключением очень гидрофобных соединений. Если нет признаков даже частичного расщепления при условиях, указанных на рис. 3, то эксперименты по разделению не имеет смысла про-
Рис. 4. Разделение смеси N-бензо-ил-оЬ-серина+ІМ-бензоил-Оі.-аланина. Условия: 50 мМ фосфатный буфер (pH 5,7); 1,0 мл/мин; контроль в УФ-области при 225 нм; образец содержал по 40 мкмоль/л каждого компонента, введено 20 мкл.
О ю 20 мин
должать. Если же наблюдается частичное расщепление, то, как правило, можно улучшить результаты путем дальнейшего изменения pH и/или ионной силы.
2) Методика разделения оптических изомеров. Колонку уравновешивают соответствующей подвижной фазой. Поскольку сорбент реагирует довольно медленно на изменение подвижной фазы, для получения полностью воспроизводимых параметров удерживания требуется достаточное время для уравновешивания. В большинстве примеров для этого достаточно 1 ч. В процессе уравновешивания и хроматографического разделения целесообразно поддерживать скорость потока, равной 1,0-*-1,5 мл/мин. Подвижную фазу в системе можно рециркулиро-вать. Выбирают длину волны, подходящую для данного соединения. Готовят —100 мкМ раствор рацемата в смешивающемся с водой растворителе (предпочтительно в подвижной фазе, но можно использовать также этиловый спирт, ацетон, диоксан и другие подобные растворители). Подготавливают к работе интегратор и подключают самописец (скорость сканирования 5 мм/мин). Вводят образец на колонку через петлю. Одновременно отмечают точку отсчета (начало эксперимента> на диаграммной бумаге и включают интегратор.
L
10*
148
Глава 5
2.9.6. Примеры.
1) N-apouA-DL-aMUHOKUCAOTbi. Аминокислоты могут быть превращены в N-ароилпроизводные реакцией с соответствующим ароилхлоридом в растворе карбоната натрия. Многие из этих производных легко расщепляются на энантиомеры [14]. Как правило, N-нафтоилпроизводные не элюируются с колонки в те-
зо MKH
10 мин
Рис. 5. Оптическое расщепление N- (2,4-динитрофенил) -DL-серина. Условия: 50 мМ фосфатный буфер (pH 5,7); 1,0 мл/мин; контроль в УФ-об-ласти при 254 нм; образец содержал 66 мкмоль/л; введено 10 мкл.
Рис. 6. Оптическое расщепление этилового эфира М-ацетил-Бь-трип-тофана. Условия: 50 мМ боратный буфер (pH 8,25); 1,0 мл/мин; контроль при 225 нм; образец содержал 75 мкмоль/л; введено 10 мкл.
чение приемлемого отрезка времени, пока к подвижной фазе не добавляется —5% (об./об.) 1-пропанола. Время удерживания увеличивается с уменьшением pH.
На рис. 4 приведены результаты оптического расщепления смеси N-бензоил-DL-серина+ N-бензоил- DL-аланина.
2) N-арил-ъъ-аминокислоты. В качестве примеров для этой группы веществ выбраны N-(2,4-динитрофенил)-DL-аминокисло-ты, легко получаемые из 2,4-динитрофторобензола и соответст-
r4
I r
Рис. 7. Структура расщепляемых ароматических сульфоксидов.
і_' '-і_
о 10 20 30 мин
Рис. 8. Оптическое расщепление Ia (R1 = R3-R5=Me, R-R2-H, R4 = ^CH3O) (рис. 7). Условия: 80 мМ фосфатный буфер (pH 5,80); 2,0 мл/мин; контроль в УФ-области при 225 нм; образец содержал 500 мкмоль/л, введено 10 мкл.
Лиганды для иммобилизации
149
Таблица 1. Хиральные соединения, рацематы которых удалось полностью или частично разделить на энантиомеры на колонках с Б CA.-силикагелей
Предыдущая << 1 .. 49 50 51 52 53 54 < 55 > 56 57 58 59 60 61 .. 106 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed