Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Аберкромби Д. -> "Аффинная хроматография" -> 47

Аффинная хроматография - Аберкромби Д.

Аберкромби Д., Алленмарк С, Арамэ С, Бара-бино Р. Аффинная хроматография — М.:Мир, 1988. — 278 c.
ISBN 5-03-000480-7
Скачать (прямая ссылка): affinnayahromotograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 41 42 43 44 45 46 < 47 > 48 49 50 51 52 53 .. 106 >> Следующая

Требуемое количество упаковываемого материала можно определить, принимая плотность для сорбентов на основе силикагеля, равной 0,4—0,6 г/мл.
При использовании суспензионных методов упаковки с применением водного буфера получают намного более эффективные колонки, чем в случае работы с суспензиями в чистой воде.
10.2.L Сухая упаковка.
1) Фритту 5 и О-кольцо 5 устанавливают в выпускном концевом фитинге /.
2) Трубку колонки 7 вставляют в концевой фитинг.
3) В колонку добавляют сухой упаковываемый материал небольшими порциями, легко постукивая по колонке несколько* раз в промежутках между порциями.
4) После заполнения колонки верхний слой адсорбента выравнивают с помощью шпателя.
5) В конце сборки колонки присоединяют впускной концевой, фитинг фритту 5 и соединитель 6.
10.2.2. Вакуумная суспензионная упаковка. Этот метод более удобен, чем сухая упаковка, так как отпадает необходимость высушивания упаковываемого материала после иммобилизации аффинного лиганда. Упаковываемый материал в виде концентрированной суспензии постоянно вводится через пипетку в выпускной концевой фитинг (собранный, как описано выше), соединенный с вакуумным насосом. Время упаковки колонки занимает лишь ~ 1 мин. После выравнивания упакованного* материала сборку колонки заканчивают, как описано выше.
10.2.3. Количество вводимого образца. Максимальное количество образца, которое может быть нанесено на колонку без появления части образца в исключающемся объеме (динамическая; адсорбционная емкость), зависит от нескольких параметров:
128
Глава 4
площади поверхности носителя, поверхностной концентрации и активности иммобилизованного лиганда и кинетических и равновесных констант системы. Были определены динамические емкости для 6-мм миниколонок, которые оказались равными 5—500 мкг или приблизительно 20—200 мкг/м2 площади по-верхности [49].
10.2А. Эффекты, не относящиеся к колонке. С коротких колонок элюируются фракции небольшого объема. Наличие соединительных трубок, трубок теплообменников и проточной кюветы может быть причиной уширения пиков и разбавления соответствующих фракций [49]. Для быстрейших и наиболее чувствительных разделений объемы этих частей и деталей должны быть сведены к минимуму. Наиболее удобно оборудование для ВАФХ, специально предназначенное для ВАФХ-колонок с очень маленьким внутренним диаметром. Если при элюирова-нии используют ступенчатое или быстрое градиентное изменение подвижной фазы, то ВАФХ-смесительная камера должна иметь очень небольшой объем или же ее следует заменить Т-образным соединителем. При использовании надлежащего оборудования разделения методом ВАФХ могут следовать друг за другом с интервалами менее 1 мин.
Литература
1. Falkbring S. О., Goihe Р. О., Nyman Р. О., Sundberg L., Porath J.t FEBS Lett., 24, 229 (1972).
2. Jackson R. J4 Wolcott R. M., Shiota Г., Biochem. Biophys. Res. Commun., 51, 428 (1973).
3. Tesser G. 1., Fisch H. U„ Schwyzer R., Helv. Chim. Acta, 57, 1718 (1974). •4. lnman /. K., Dintzis H. Af., Biochemistry (Wash.), 8, 4074 (1969).
5. Harvey M. /., Lowe C. R., Craven D. B.t Dean P. D. G., Eur. J. Biochem., 41 335 (1974)
6. Lowe C. R.t Harvey M. J.t Dean P. D. G., Eur. J. Biochem., 41, 341 (1974).
7. Dean P. D. G., Watson D. H., in: Affinity Chromatography, Hofmann-Osten-hoff O. et al. (eds.), Pergamon Press, Oxford, 1978, p. 25.
8. Balny C.t Douzou P., Biochimie, 61, 445 (1979).
9. Douzou P., Q. Rev. Biophys., 12, 521 (1979).
10. Lowe C. R., Harvey M. J., Dean P. D. G., Eur. J. Biochem., 41, 347 (1974),
11. Harvey M. J., Lowe C. R4 Dean P. D. G., Eur. J. Biochem., 41, 353 (1974).
12. Angal S„ Dean P. D. G., Biochem. J., 167, 301 (1977).
13. Qadri F., Dean P. Z)..G., Biochem. J., 191, 53 (1980).
14. Middle F. A., Dean P. D. G., unpublished observations.
15. Jankowski W. von Neuenchhausen W., Sulkowski ?., Carter W. Biochemistry (Wash.), 15, 5182 (1976).
16. Bollin E. J. R., Vastola K., Oleszek D., Sulkowski ?., Prep. Biochem., 8, 259 (1978).
17. Seelig G. F., Colman R. F., J. Biol. Chem., 252, 3671 (1977).
18. Hey K, Ph. D. Thesis, Liverpool University (1983).
19. Robinson /. B., Jr.t Strottman J. M., Stellwagen ?., Proc. Natl. Acad. Sei USA, 78, 2287 (1981).
Методики эксперимента
129
20. Lowe С. R4 Dean P. D. G4 Affinity Chromatography, published by Wiley, London, 1974.
21. Cuatrecasas P4 Biochem. Biophys. Res. Commun., 35, 531 (1969).
22. Akanuma Y4 Kuzuya T4 Hayashi M., !de T4 Kuzuya N.. Biochem. Biophys. Res. Commun., 38, 947 (1970).
23. Givol D., Weinstein Y4 Gorecki M4 Wilchek M.t Biochem. Biophys. Res. Commun., 38, 947 (1970).
24. Ternynck T4 Avrameas S4 Biochem. J., 125, 297 (1971).
25. Spitzer R. H4 Kaplan M. A4 Leija J. G., Int. Arch. Allergy, 34, 488 (1968).
26. Tanigaki N4 Kitagawa M4 Yagi Y4 Pressman D.t Biochem. Biophys. Res. Commun., 27, 747 (1967).
27. Dandliker W. B4 Alonso R4 de Saussure U. A4 Kierszenbaum F4 Levi-sonS. A4 Schapiro H. C4 Biochemistry (Wash.), 6, 1460 (1967).
28. Avrameas S4 Ternynck T4 Biochem. J., 102, 37C (1967).
Предыдущая << 1 .. 41 42 43 44 45 46 < 47 > 48 49 50 51 52 53 .. 106 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed