Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 48

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 42 43 44 45 46 47 < 48 > 49 50 51 52 53 54 .. 122 >> Следующая

(1987).
43. Hole N. J., Catty J. P., Catty D. Mol. Immunol., 24, 75 (1986).
44. Praputpittaya K. Ph. D. Thesis, University of Birmingham, UK, 1986.
45. Eichmann K-, Kindt T. J. J. Exp. Med., 134, 532 (1971).
46. Kennedy J. F., Catty D., Klep P. A. Int. J. Biol. Macromol., 2, 137
(1980).
47. Ling N. R., Stephens G., Bratt P., Dhaliwal H. S. Mol. Immunol., 16,
637" (1979).
48. Gold E. R., Fudenberg H. H. J. Immunol., 99, 859 (1967).
49. Avrameas S., Taudou B., Chuilon, Immunochemistry, 6, 67 (1969).
50. Jefferis R. et al. Immunol. Lett., 10, 223 (1985).
51. Steard M. In; Weir D. M. (ed.), Handbook of Experimental Immunology,
Vol. 1, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 4th edition, p. 25.1,
1986.
52. Mage R. G. Contemp. Top. Mol. Immunol., 8, 89 (1981).
53. Herzenberg L. A., Herzenberg L. A. In: Weir D. M. (ed.), Handbook
of Expe-
rimental Immunology, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 3rd
edition* p. 39, 1978.
ГЛАВА 3
МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА МЫШИ
Дж. Браун и Н. Р. Линг
1. Основные принципы получения антителообразующих клеточных линий
В 50-е гг. Вернет, Ерне, Ледерберг и Толмейдж постулировали, что каждый
В-лимфоцит запрограммирован на синтез антител одной определенной
специфичности, относящихся к тому же идиотипу, что и молекулы,
экспрессированные на поверхности данного лимфоцита в качестве антигенных
рецепторов. В настоящее время это положение убедительно доказано. Если
животное иммунизируют каким-либо антигеном, то начинается клональная
экспансия и дифференцировка тех В-лимфоцитов, которые распознают этот
антиген. В результате образуются плазматические клетки, которые
продуцируют антитела. Если бы индивидуальные антиген-реактивные клетки
лимфоидной ткани иммунизированного животного удалось длительное время
поддерживать в культуре, то надосадочная жидкость содержала бы однородные
молекулы антител (моноклональные антитела), которые были бы способны
распознавать только один или несколько близкородственных антигенов. К
сожалению, потомство индивидуального реактивного лимфоцита не удается
длительное время выращивать в культуре для получения больших количеств
моноклональных антител (МКА). Впервые эта проблема была решена Келером и
Мильштейном в 1975 г. [1] Исследователям удалось трансформировать
антителообразующие лимфоциты путем слияния их с клетками
иммортализованной клеточной линии с последующим клонированием
индивидуальных гибридных клеток. Таким образом были получены линии
гибридных клеток (гиб-ридомы), каждая из которых продуцировала молекулы
антител одного и того же идиотипа.
Уже давно было известно, что различные типы клеток разных видов животных
могут сливаться между собой с образованием гибридных клеток. Однако
высокодифференцирован-ные признаки партнеров сохраняются в том случае,
если они представляют собой клетки сходных линий, находящиеся
приблизительно на одной и той же стадии дифференцировки [2]. Клеточная
линия, секретирующая антитела, образуется путем слияния
антителообразующей клетки лимфоидной ткани иммунизированного животного и
клетки плазмацитомы, нахо-
Моноклональные антитела мыши
117
дящейся на сходной стадии дифференцировки. Полученная в результате
гибридом а наследует от одной родительской клетки способность к секреции
антител определенного идиотипа и от другой (клетки 'плазмацитомы)-
способность к неограниченному росту in vitro. Наиболее успешно получают
гибридо-М1Ы мышей и крыс, менее успешно - гибридомы человека. Технология
гибридизации клеток других видов животных разработана недостаточно.
Альтернативным подходом для получения антителооб'разующих клеточных линий
человека служит использование вируса Эпштейна - Барр (ВЭБ) для
трансформации определенной популяции В-клеток иммунизированного
индивидуума [3]. Клетки, продуцирующие большое количество антител, затем
подвергают селекции и клонированию (см. гл. 4). В данной главе будет
рассматриваться только технология получения гибридом. Известны
многочисленные литературные обзоры, посвященные этой теме, например [2,
4-6].
2. Оборудование и материалы
Необходимо хорошее оборудование для работы с культурами, в том числе С02-
термостат (содержание С02 в воздухе - 5%)- Желательно иметь ламинарный
бокс для осуществления манипуляций в стерильных условиях. Следует
отметить, что знание основ асептики и некоторый опыт в работе с
клеточными культурами важны для успешного проведения работ. Для
визуального наблюдения за культурами необходим инвертированный микроскоп
(например, Olympus СК; модель снабжена широкой ровной подста'вкой,
объективом ХЮ и бинокулярной насадкой WF 15Х). Кроме контейнеров с жидким
азотом для хранения плазмацитом и гибридом, для получения моноклональных
антител необходимо не так уж много специального оборудования. Позднее
будут рассмотрены возможные варианты процедур скрининга, которые, 'по-
видимому, следует усовершенствовать и более широко внедрять в практику.
Для иммунизации необходимо иметь инбредные линии мышей (обычно BALB/c)
Предыдущая << 1 .. 42 43 44 45 46 47 < 48 > 49 50 51 52 53 54 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed