Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
хроматографических условий и взаимодействия элюента и разделяемых
соединений с неподвижной фазой.
2.2.9.3. Хиральные фазы. Проблема разделения оптических изомеров при
помощи жидкостной хроматографии обсуждается с момента разработки этого
метода. В работе [106] рассмотрены примеры успешного и воспроизводимого
разделения энанти-омеров на мягких гелях. По размеру использованных
колонок эти примеры соответствуют препаративному разделению, однако если
исходить из количества образца, наносимого в расчете на грамм неподвижной
фазы (10-3 г/г), то их можно отнести к примерам аналитического
разделения. Длительность разделения и разбавление пробы в ходе разделения
были значительными из-за большого диаметра частиц неподвижной фазы. В
литературе описано также успешное разделение энантиомеров в органическом
элюенте на ацетилцеллюлозе [107].
Высокая эффективность разделения энантиомером достигнута на привитых
фазах на основе силикагеля [108, 109]. При использовании неводных
элюентов были успешно разделены энантиомерные сульфоксиды, амины,
аминокислоты, спирты, гидроксикислоты и т. д.
Разделение аминокислот и их производных проводят на хиральных
неподвижных фазах, представляющих собой органические полимерные носители
[ПО] или силикагели [111-116] с привитыми аминокислотами. Элюирование
проводят смесью вода/ацетонитрил или водой. Необходимым условием является
наличие в составе элюента и на неподвижной фазе атомов соответствующих
металлов, например меди. На рис. 2.36 приведен пример хирального
разделения свободных аминокислот. Эффективность таких колонок
относительно невелика из-за медленного массопереноса при лигандообменных
процессах. Коэффициент емкости в значительной степени зависит от
содержания меди, состава элюента, температуры и, конечно, привитой
аминокислоты. Кроме энантиомерного разделения аминокислот, в лите-
88 Глава 2
ратуре описано разделение барбитуратов и других лекарственных средств.
[П6].
2.2.10. Выбор разделительной системы
В предыдущих разделах были обсуждены основы различных механизмов
разделения. В настоящее время фирмы-поставщики выпускают более 100
названий неподвижных фаз. Безусловно, некоторые из них очень близки по
свойствам, хотя и называются по-разному. Селективность обращенных и
привитых фаз, как и селективность *.*". Л"Р"."П", разде- фаз на основе
силикагеля, зависит от
ление свободных аминокис- их физических свойств и характерис-
лот. тик поверхности. Неудивительно по-
Неподйижная фаза: силикагель ЭТОМУ, ЧТО Получение НеПОДВИЖНЫХ с привитым
хиральным проли- ,
ном; элюент: 71о-4 м водный фаз с воспроизводимыми характерно
^раствор CuSO,; температура: тиками - задача ДОСТЭТОЧНО СЛОЖНЭЯ.
Свойства неподвижных фаз могут меняться от
партии к партии. Кроме того, неподвижные фазы одного названия,
выпускаемые различными фирмами, также могут существенно различаться.
Начинающим хроматографистам целесообразно выбирать разделительную
систему исходя из механизма разделения, поскольку многие примеры
разделения описаны в справочниках по классической колоночной жидкостной
хроматографии [118- 120]. В первую очередь следует изучить именно ту
литературу, которая цитируется в этих справочниках.
Схема выбора разделительной системы в соответствии с растворимостью
пробы приведена на рис. 2.37. Располагая определенной информацией о
составе разделяемой смеси и структуре входящих в эту смесь соединений,
можно составить некоторое представление об "оптимальной" системе (табл.
2.5).
Следует отметить, что хроматографическую систему необходимо
рассматривать всю в целом, т. е. неподвижную фазу, элюент и разделяемые
соединения. На рис. 2.38 показано, что время удерживания двух
водорастворимых нейтральных полимеров (декстранов) на неподвижной
гликолевой фазе составляет менее tM• Это означает, что разделение
происходит по механизму ГПХ. Полимерный же стандарт (полиэтиленгликоль
600) удерживается и частично разделяется на его полимолекулярные
компоненты.
Выбор конкретной разделительной системы зависит также от цели,
которую преследуют при разделении тех или иных
Растворимы в:
Неподвижные фазы:
Злюенты:
гептане, адсорбция на
толуоле полярных фазах с.
гептан, хпорпропан, дихпорметн, возможное добавками спиртов___________
распределительные тройные системы
адсорбция на неполярных фазах
ИПХ на обращенных фазах
гептан или дихлорме тан + водноспирто вые смеси
смеси воды с этано -лом, ацетонитрилом или ТГФ
водный элюент с орга ническими основаниями или кислотами в
качестве противоионов
Кислые или ГПХ в водных вода или буфер и соле
основные средах вые растворы
гептане, гпх в органичес дихлорметан, 1
толуоле ких средах толуол, тгф
воде ------ ГПХ вводных =о
средах
вода или буфер и солевые растворы
Рис. 2.37. Выбор разделительной системы в соответствии с растворимостью
