Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 37

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 296 >> Следующая

компоненты, направляют на колонку II. Такое переключение может
осуществляться в самом начале элюирования, или где-то на половине его,
или же на конечном этапе предварительного обогащения. В то время когда
разделение ведется на колонке II (насос соединен непосредственно с
колонкой II и детектором), колонку I промывают и регенерируют, например
пропуская обратный поток элюента при помощи второго насоса. Размыванием
полос в кранах переключения и в коммуникациях можно пренебречь, если
коэффициент емкости для разделяемых соединений на колонке II выше, чем на
колонке I. В этом случае разделяемые соединения концентрируются в верхней
части колонки II. Следует отметить, что смена элюента на начальном этапе
элюирования с колонки II, если таковая возможна, ускоряет разделение.
Предварительное концентрирование можно осуществить по ¦схеме,
аналогичной приведенной на рис. 2.39,6. В данном случае раствор
разбавленной пробы пропускают через колонку I. Если это водный раствор, в
котором необходимо повысить концентрацию органических компонентов,
колонку заполняют обращенной фазой. В конце этой стадии меняют элюент и
элюируют удерживаемые на колонке вещества, причем интересующие
исследователя фракции направляют для разделения на аналитическую колонку.
В то время, когда на второй колонке проводится разделение, первую колонку
промывают и регенерируют. Оптимизация состава элюента и условий
разделения должна быть проведена с особой тщательностью, так как на
выходе из первой колонки "вырезают" достаточно узкий сегмент элюата.
На рис. 2.40 на примере определения содержания циклоспорина А (СуА) в
крови показано разделение с переключением потока и со сменой элюента для
ускорения анализа [128]. Схема соединения колонок и переключения потока
та же, что и на рис. 2.39, б. Пробу вводят в короткую предколонку,
наполненную пористым носителем (диаметр частиц 30-40 мкм) с нанесенной
обращенной фазой Q- Полярные компоненты разделяемой смеси элюируются на
этой стадии и направляются непосредственно в детектор. Сегмент элюата на
выходе из колонки, содержащий СуА и внутренний стандарт циклоспорин D
(CyD), переносится более сильным элюентом в колонку II, за-юлненную
неподвижной фазой С(в (диаметр частиц 5 мкм).
Хроматографическая колонка 95*
Рис. 2.40. Переключение колонок со сменой элюеита для быстрой подготовки
пробы к разделению по методу "вырезания сердцевнны потока" на примере
определения циклоспорина А (СуА) в кровш (см. также текст) [128].
а - кровь, не содержащая СуА: б - 100 иг/мл СуА; в - 1000 нг/мл CyD;
обнаружение: по поглощению при 210 нм, 0,02 ед. поглощения.
Как показано на рис. 2.40, колонки I и II соединяют друг с другом только
на короткое время с тем, чтобы проба из первой колонки перешла во вторую.
Коэффициент емкости на второй колонке выше, поэтому зоны разделяемых
соединений сужаются. Окончательное элюирование проводится другим, более
сильным элюентом. В холостом опыте (сигнал А на рис. 2.40) какие-либо
компоненты, мешающие обнаружению СуА, не элюируются, так что предел
обнаружения можно существенно снизить. После завершения разделения
колонку I вновь соединяют с детектором, регенерируют подходящим для этого
растворителем и подготавливают для нового ввода пробы. Одновременно при
помощи второго насоса регенерируют колонку II. Благодаря тому что на
колонке II происходит сужение зон разделяемых компонентов, для анализа
достаточно всего около 0,5 мл крови, причем предел обнаружения
циклоспорина составляет 20 нг/мл.
Приведенные примеры показывают, что метод переключения потока
позволяет повысить селективность разделения, провести обогащение
разбавленных проб и осуществить избира-
96 Глава 2
тельное обнаружение нескольких компонентов, входящих в состав сложной
смеси. Прием "вырезания" внутреннего сегмента элюата, поступающего из
первой колонки, и переключение колонок можно использовать для
автоматизированной предварительной обработки пробы и ее очистки в потоке.
Литература
1. Snyder L. R., Kirkland. J. J. Introduction to Modern Liquid
Chromatography. Wiley-Inlerscience, New York, 1979.
2. Энгельгард К. Высокоэффективная жидкостная хроматография. - М.: Мнр,
1979.
3. Horvath С. High Performance Liquid Chromatography, Advances and
Perspectives, vol. 1, and 2, Academic Press, New York, 1980.
4. Krstulovic A. М., Brown P. R. Researved-Phase High Performance
Liquid Chromatography. Wiley-Interscience, New York, 1982.
5. Giddings J. C. Dynamics of Chromatography. Dekker, New York, 1965.
6. Guiochon G. in: C. Harvath (ed.): High Performance Liquid
Chromatography, Advances and Perspectives, vol. 2, p. 1-56. Academic
Press, New York, 1980.
7. Halasz I. Z.. Anal. Chem., 277, 257 (1975).
8. Littlewood A. B. Gas Chromatography, 2nd Ed. Academic Press, New
York, 1970.
9. Halasz I. in: J. J. Kirkland (ed.): Modern Practice of Liquid
Chromatography, Ch. 9. Wiley-Interscience, New York, 1971.
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed