Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 36

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 30 31 32 33 34 35 < 36 > 37 38 39 40 41 42 .. 296 >> Следующая

хроматографические колонки соединяют последовательно или параллельно. В
отличие от газовой хроматографии элюент в таких хроматографических
системах играет важную роль. В хроматографах с несколькими колонками
менять состав подвижной фазы сложно. Поэтому при таком подходе приходится
ограничиваться изменением длины колонки (числа теоретических тарелок) как
фазового отношения неподвижной фазы (путем изменения количества жидкой
неподвижной фазы, удельной поверхности, гидрофобности привитых фаз и т.
д.). Выбор неподвижных фаз определяется главным образом их совместимостью
с применяемыми элюентами. Обычно предварительное разделение
осуществляется на относительно короткой колонке, фракции полученного при
этом элюата последовательно разделяются на других колонках, заполненных
той же самой или другими неподвижными фазами. Этот прием ускоряет анализ,
увеличивает селективность и разрешение, позволяет осуществить
предварительное концентрирование пробы или ее предварительную обработку в
потоке.
Трудно дать какие-либо общие рекомендации по методике разделения с
распределением потока, поскольку особенности такого разделения в большой
степени зависят от его целей и состава пробы. Поэтому поясним ниже
приицип метода на типичных примерах. Оборудование для разделения с
распределением потока выпускает несколько фирм. Выбор оборудования для
решения конкретной аналитической задачи требует в каждом случае
индивидуального подхода и оптимизации условий процесса.
В тех случаях, когда требуется определить содержание лишь нескольких,
а не всех компонентов сложной смеси, ускорить анализ можно при помощи так
называемого метода "проходящего состава" (Ьох-саг) [121]. Суть метода
заключается в следующем: сначала пробу разделяют на короткой колонке,
после чего фракции, содержащие интересующие исследователя компоненты,
подаются на вторую эффективную колонку, а остальные фракции направляются
на сброс. На второй колонке последовательно, один за другим,
осуществляется несколько анализов (мелькают вагоны проходящего поезда -
отсюда и название метода).
Метод распределения потока позволяет оптимизировать селективность
колонки и тем самым улучшить разрешение. В этом случае предварительно
фракционированная проба разделяется на различных колонках, соединенных
параллельно или последо-
Хроматографическая колонка 93.
Насос]-ГпиШ-I CI
Кран
СП
СШ
Летектор
Насос |-[-6SSS-
ПРОБЫ Г
Гп
К.
.11
-(Детектор)
Рис. 2.39. Схема переключения колонок.
а - колонки соединены параллельно; б - переключение колонок для
обогащения пробы-и ее предварительного разделения (очистки). Переключение
потока элюента, подаваемого насосами CI и СИ, можно осуществить
посредством переключающих краиов KI нлн КП
соответственно.
вательно. Поскольку удалить элюент из распределительного-сегмента сложно,
применимость указанных систем ограничена лишь такими колонками, в которых
элюирование ведется тем же элюентом, что и на стадии предварительного
разделения. Соответствующие примеры описаны в работах [122, 123].
Разделение проводилось на колонках, содержащих различные количества
неподвижной жидкой фазы (фазовое отношение) и неподвижные фазы с
различной удельной поверхностью, при постоянном составе элюента. Схема
этого метода показана на рис. 2.39. Предварительное разделение
осуществлялось на колонке I. Представляющие интерес фракции, полученные
на этой стадии, направлялись на колонку II или III. Если на колонке I
достигалось приемлемое разделение всех компонентов пробы, то поступающий
из этой колонки элюат направлялся непосредственно в детектор. Оптимизация
системы проводилась очень тщательно. Переключение осуществлялось только в
то время, когда из колонки I элюат не поступал. Практические возможности
этого метода возрастают, если состав элюента можно оптимизировать перед
каждой колонкой с помощью дополнительной системы подачи растворителя.
Часто хроматографисту достаточно определить один или лишь несколько
компонентов сложной смеси. В этом случае систему с распределением потока
используют для очистки пробы или обогащения ее микрокомпонентами
непосредственно в потоке [124-127]. Так, при работе с биологическими
объектами проводится, например, предварительное удаление из пробы
полимерных компонентов, так как это позволяет увеличить время жизни
аналитической колонки. В таких случаях к качеству колонки, на которой
проводят предварительное разделение, не предъявляют жестких требований.
Эту колонку можно заполнять неподвижными фазами с частицами большого
размера
94 Глава 2
(недорогими материалами). Схема такого варианта разделения с
переключением потока приведена на рис. 2.39, б. Колонка I также служит
для предварительного разделения. Кран Vii расположен так, что колонка I
непосредственно соединена с детектором в обход колонки II. Эффективность
колонки I недостаточна для полного разделения пробы, поэтому часть элю-
ента, поступающего из колонки I и содержащего интересующие исследователя
Предыдущая << 1 .. 30 31 32 33 34 35 < 36 > 37 38 39 40 41 42 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed