Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка):
Организация и экспрессия трансформирующей области и Т-антигенов Е1А и Е1В вирусов Ad2 и AdS
Трансформирующая область Ad2 и Ad5 находится в ранней области Е1, которая расположена в левой части вирусного генома, составляющей 11—12% его длины. На это указывают результаты а) трансформации клеток с помощью трансфекции рестрикционными фрагментами ДНК, охватывающими область El Ad2 и Ad5 (группа С) [91, 293], Ad 12 (группа А) [265] и Ad7 (группа В) ([54, 260]; б) анализа нуклеотидной последовательности вирусной РНК, экспрессируемой в трансформирован-
ных клеточных линиях [35, 70, 71, 96, 253, 304, 305]. О трансформирующей области El Ad2 и Ad5 известно достаточно много: определена нуклеотидная последовательность ДНК, кодирующая трансформирующие гены [17, 85, 294], идентифицированы основные белки, которые кодирует мРНК Е1. Все дальнейшее ёбсуждение относится главным образом к трансформирующим Дщам Ad2 и Ad5 (вируса, родственного Ad2) и к продуктам эт\.х генов. Анализ нуклеотидной последовательности трансформирующих областей Ad7 и Adl2 показывает, что молекулярная организация аденовирусов групп А, В и С на удивление сходна [53, 148, 273].
Современные представления об организации и экспрессии области El Ad2 иллюстрирует рис. 12.5. Транскрипционные элементы Е1А и Е1В расположены в участках 1,3—4,5 и 4,6—11,1 единиц карты соответственно. При продуктивной инфекции во время ранней фазы с одного промотора транскрибируются две ранние мРНК Е1А—13S и 12S; во время поздней фазй с того «се промотора транскрибируется 9S-MPHK Е1А, но никакого участия в трансформации клетки она не принимает. 13S- и 12S-MPHK Е1А образуются из общего ядерного предшественника и различаются размерами интрона, выщепляемого из этого предшественника во время процессинга [217]. В месте сплайсинга эти РНК несут разные 5'-донорные участки и одинаковый З'-акцепторный. Т-антигены, которые кодируются 13S- и 12S-мРНК Ad2 El А, имеют мол. массы 32К (289 аминокислот) и 26К (243 аминокислоты) соответственно и содержат одинаковые аминокислотные последовательности на N- и С-концах, как это видно из нуклеотидной последовательности кДНК-копий мРНК Е1А [217]. Т-антиген Е1А, состоящий из 289 аминокислотных остатков, отличается от антигена из 243 аминокислот наличием участка длиной 46 остатков.
Т-антигены Е1А по непонятным причинам очень сложны. Они были идентифицированы несколькими способами: путем бесклеточной трансляции мРНК, очищенных при помощи гибридизации; методом двумерного гель-электрофореза клеточных экстрактов, а также с помощью иммунопреципитации экстракта меченных [358]-метионином зараженных клеток, осуществленной с использованием антител к пептидам [19, 65, 100, 101„ 112, 114, 185, 244, 303]. Любопытно, что в разных лабораториях было обнаружено неодинаковое число Т-антигенов: от одного до трех Т-антигенов с мол. массой 41 К— 52К, кодируемых 13S-мРНК Е1А (мРНК белка из 289 аминокислот), и от одного до трех Т-антигенов с мол. массой 35К—47К, кодируемых 12S.-mPHK Е1А (мРНК белка из 243 аминокислот) (значения мол. масс получены из данных об электрофоретической подвижности белков в полиакриламидных гелях в присутствии додецил-
13S-mPHK
559 AUG 498 t
1540
UAA 1630
A UAA I
l/V22Sif
2016
AUG
1699
3501
3504 3589
4061
•22S-MPHK
41-5ZKessss^s refts>1540
19 К
559 И
12S-MPHK
35-47K
9S-MPH1?1
1ЧУУУУУУУуууууууууууууууууууууууууууу>. 53K гг 56 13
3589
224Э
1УЧЧЧЧ-чУУУУЧУ\-> 19К 11
¦ 135-мРНК
28К И 11
РчЧЧЧЧУУ
(1Z)
^тччтчч» 20К 13
Ед.карт. О
3600 4020
AUG ОЛА
|Ц 9S-MPHK 3576 4061
lyyyyyyyyyy^ IX
10 11 1Z
Ър о
500
1500
2000
3000
3500
4000
3URF10
'С
И URF 11
Рис. 12.5. Структура трансформирующих областей генома Ad2 Е1А и Е1В и соответствующие генные продукты. Черные стрелки — вирусные мРНК; рядом с ними указаны константы седиментации (в единицах S). Стрелки направлены к З'-кон-цу. Штриховые линии — выщепляемые при сплайсинге интроны. Заштрихованные стрелки — белки Е1; рядом с ними указаны значения мол. массы. Номера нуклеотидов относятся к сайтам инициации и терминации транскрипции, донорным и акцепторным сайтам сплайсинга и к сайтам инициации и терминации трансляции, f 1, /2 и /3 — трансляционные рамки считывания; URF10 н URF11 — открытые рамки считывания для предполагаемых белков Е1 [85]. (Из [98], с разрешения авторов.)
