Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Филдс Б.Н. -> "Вирусология: В 3-х т. Том 1 " -> 172

Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.

Филдс Б.Н., Найп Д.М., Мэрфи Ф.А., Харрисон С. Вирусология: В 3-х т. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 492 c.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка): virusologiyat11989.djvu
Предыдущая << 1 .. 166 167 168 169 170 171 < 172 > 173 174 175 176 177 178 .. 224 >> Следующая

13S-MPHK Е1А.
Для трансформации нужен генный продукт аденовирусной US-мРНК Е1А
К изучению вопроса об участии в трансформации Т-антигена (антигенов), кодируемого 12S-mPHK Е1А, обратились совсем недавно. Были сконструированы два мутанта Ad2—pm975 и d/231, в которых имеются нарушения, влияющие на сплайсинг 12S-mPHK ElA Ad2, но не на сплайсинг 13S-mPHK ElA Ad2. Оказалось, что оба мутанта дефектны по функции трансформации; зараженные ими клетки имеют фенотип, характерный для частично трансформированного состояния [125, 193]. Таким образом, по крайней мере два продукта гена Е1А участвуют в индуцируемой аденовирусом трансформации, причем один кодируется 13S-MPHK, а другой — 12S-mPHK.
Для повышения опухоперодности и репрессии активности гена клетки-хозяина, кодирующего главный антиген гистосовместимости, необходим генный продукт 13S-MPHK Е1А аденовируса 12
Крысиные клетки, трансформированные Adl2, высокоонко-генны для новорожденных сингенных крыс в отличие от клеток, трансформированных Ad2 и Ad5. Последние данные показывают, что высокая опухолеродность клеток, трансформированных Adl2, отчасти обусловлена продуктом гена 13S-MPHK Е1А. В клетках, трансформированных Ad 12, «выключен» синтез двух клеточных белков с мол. массой 32К и 45К, которые экспрессируются в клетках, трансформированных Ad5, и в ^трансформированных клетках [256]. Белок 45К представляет собой тяжелую цепь трансплантационного антигена крысиного главного комплекса гистосовместимости (МНС) класса I [256]. Отсутствие этого белка и высокая опухолеродность коррелируют с экспрессией последовательностей ElA Ad 12; это следует из работ по трансформации клеток плазмидами, содержащими различные комбинации генов Е1А и Е1В вирусов Adl2 и Ad5 [12, 256]. Трансформированные крысиные клетки, в которых происходила экспрессия генов ElA Ad5, легко разрушались in vitro Тс-лимфоци-тами, направленными против антигенов МНС класса I, тогда как трансформированные клетки, в которых наблюдалась экспрессия генов ElA Adl2, были существенно более резистентными [12]. Это подтверждает гипотезу, которая объясняет онкоген-ность клеток, трансформированных Ad 12, для иммунокомпетент-ных сингенных крыс тем, что у них подавлен синтез антигенов класса I и поэтому у них отсутствует Т-клеточный ответ на эти белки.
Продукт гена Adl2, ответственный за подавление синтеза антигенов класса I, кодируется 13S-mPHK ElA. Это следует из
результатов работ с клетками, трансформированными мутантами Adl2 с нарушениями в кодирующей области 13S-mPHK Е1А [12]. Супрессия идет на уровне синтеза клеточной мРНК, которая кодирует МНС-антиген [256]. 13S-mPHK Е1А Adl2, кроме функции супрессии синтеза МНС-антигена, кодирует функцию активации экспрессии Е1В [16, 18]. По-видимому, за эти функции отвечают разные домены Т-антигена 13S-MPHK, поскольку в клетках, трансформированных мутантной плазмидой SVR7 (которая содерхчт область 13S-PHK с мононуклеотидной делецией), активируется экспрессия Е1В, хотя в них не подавлен синтез антигенов класса I.
Интересно также, что если трансформировать клетки гибридными плазмидами, кодирующими оба Т-антигена 13S-mPHK Е1А (и Ad5, и Ad 12), то синтезируется нормальное количество МНС-антигенов. Это означает, что продукт гена 13S-mPHK Ad5 доминантен по отношению к продукту гена 13S-MPHK Adl2. Возможно, продукты этих генов конкурируют за взаимодействие с одним и тем же клеточным регуляторным фактором. Чтобы выяснить механизм регуляции экспрессии генов у эукариот, очень важно понять, как продукты генов 13S-mPHK Ad осуществляют активацию или репрессию клеточных генов.
Участие аденовирусных Т-антигенов Е1А в репликации вирусов
Хотя в трансформации клеток принимают участие генные продукты 12S- и 13S-mPHK Е1А, для нормальной продуктивной инфекции клеток человека в культуре, по-видимому, нужен только продукт гена 13S. Мутанты Ad2 d/231 и рт975, дефектные по 12S-mPHK Е1А, нормально растут в культурах клеток человека при обычных условиях [125, 193]. Однако при блоке пролиферации в клетках человека мутант рт975 не реплицируется, тогда как вирус дикого типа реплицируется. Это означает, что 12S-мРНК Е1А кодирует функции, которые в естественных условиях нужны для вирусной репликации в нереплицирующихся клетках, таких как клетки эпителия дыхательных путей [193].
Роль аденовирусных Т-антигенов Е1В в трансформации клеток
Участие продуктов генов Е1В в трансформации клеток подтверждается как результатами работ с дефектными по функции трансформации мутантами, так и экспериментами по трансформации с помощью ДНК. Роль большого Т-антигена- Е1В (белка 53К) в процессе трансформации неясна. У дефектных по трансформации мутантов в группе hrll обычно нарушен синтез
Т-антигена 53К [165]. Вирусные частицы этих мутантов не способны трансформировать клетки [90], но при трансфекции вирусной ДНК трансформация осуществляется с такой же эффективностью, как и в случае вирусов дикого типа [242]. В чем причина такого различия между вирусом hrll и вирусной ДНК hrII —пока неясно. Была выдвинута гипотеза, что интеграция вирусной ДНК из родительского вируса, заражающего клетку (при низкой множественности заражения), осуществляется лишь при наличии некой функции большого Т-антигена Е1В, тогда как при интеграции трансформирующей вирусной ДНК (т. е. при наличии большого числа копий вирусной ДНК) используются механизмы клетки-хозяина [89, 242].
Предыдущая << 1 .. 166 167 168 169 170 171 < 172 > 173 174 175 176 177 178 .. 224 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed