Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка):
Способность мутантной ДНК hrll трансформировать клетки согласуется с данными о том, что левый сегмент ДНК Ad5, составляющий 8% длины всего генома, может индуцировать трансформированный фенотип точно так же, как интактный вирус [91, 293]. Таким образом, для трансформации in vitro интактный большой Т-антиген Е1В, по-видимому, не нужен. Однако неизвестно, синтезируется ли (и если синтезируется, то функционирует ли) в клетках, трансформированных этим сегментом ДНК, N-концевой фрагмент большого Т-антигена Е1В. Более того, пока не изучен вопрос о возможном участии в процессе трансформации Т-антигена Е1В 20К.
Хотя большой Т-антиген Е1В не нужен для трансформации клеток in vitro, последние работы показывают, что продукт этого гена может влиять на опудолеродность Ad-трансформированных клеток в отношении мышей nude. Первичные клетки почек крысят, трансформированные аденовирусами группы А, высоко-опухолеродны для таких мышей, тогда как клетки, трансформированные вирусами группы С, — нет. Ван ден Елеен и др. [292] создали гибридные (группа А/группа С) Е1-плазмиды, содержащие интактный ген Е1А одной группы и интактный ген Е1В другой. Первичные клетки почек крысят, трансформированные гибридными плазмидами (Е1А группы С)/(Е1В группы А), оказались высокоонкогенными, в то время как клетки, трансформированные гибридными плазмидами (Е1А группы А)/(Е1В группы С), — слабоонкогенными. Таким образом, различия в онко-генности клеток, трансформированных вирусами группы А и группы С, для мышей nud обусловлены, по-видимому, различиями в продуктах гена Е1В. Чтобы дифференцировать роль большого и малого Т-антигенов Е1В, Бернарде и др. [11] сконструировали гибридные плазмиды, кодирующие различные комбинации малых и больших Т-антигенов Е1В групп А и С. Оказалось, что опухолеродность трансформированных клеток определяется большим Т-антигеном, т. е. белком Е1В-53К. Таким образом, для высокой опухолеродности трансформированных клеток ну-
жен, по-видимому, функциональный большой Т-антиген Е1В Ad 12. Ранее, однако, было показано, что фрагмент G Hindlll Ad 12 (единицы карты 0—6,8), который не может кодировать интактный большой Т-антиген Е1В, обладает способностью трансформировать крысиные клетки, и эти клетки высокоонко-генны для новорожденных крысят [264, 265]. Более того, как уже говорилось, 13S-mPHK Е1А Adl2 кодирует некую функцию, которая подавляет синтез МНС-антигенов класса I, и, возможно, именно этим определяется высокая онкогенность крысиных клеток, трансформированных Ad 12, в отношении новорожденных крысят. Следовательно, онкогенность трансформированных аденовирусами клеток в отношении иммунодефицитных мышей nude и иммунокомпетентных новорожденных крысят определяется разными продуктами генов Е1.
Т-антиген Е1В-53К присутствует и в ядре, и в цитоплазме инфицированных и трансформированных клеток; об этом свидетельствуют результаты работ по биохимическому фракционированию [97, 243] и иммунофлуоресцентной микроскопии с приме" нением антител к пептидам [303]. Иммунопреципитаты, содержащие Т-антиген Е1В-53К Ad5, обладают протеинкиназной активностью [21, 166]. Неизвестно, однако, присуще ли это свойство самому Т-антигену Е1В-52К или какому-то связанному с ним белку клетки-хозяина.
Большое значение для трансформации клеток имеет Т-антиген Е1В-19К. Хиннадураи [34] выделил несколько дефектных по трансформации крупнобляшечных мутантов, картирование которых осуществляли методом спасения маркера в области Е1В. У двух таких мутантов, 1рЗ и 1р5, мутации были локализованы (если судить по нуклеотидной последовательности ДНК) в N-концевой области Т-антигена Е1В-19К [34]. Таким образом, N-концевой домен белка Е1В-19К играет важную роль в процессе трансформации.
Цитоцидные (cyt) мутанты дефектны по трансформации и вызывают интенсивное разрушение продуктивно инфицированных клеток. Сравнительно недавно было показано, что cyt-щ-тации Ad2 и Ad 12 локализованы в кодирующей области Т-антигена 19К [227а]. Этот результат является еще одним доказательством того, что Т-антиген Е1В-19К играет важную роль в трансформации клеток. Имеются также данные о том, что Т-антиген 19К принимает участие в защите клеточной и внутриклеточной вирусной ДНК от нуклеаз во время поздних стадий продуктивной инфекции (Subramanian et al., в печати).
Судя по результатам иммунофлуоресцентной микроскопии с применением антител к С-концевой части Т-антигена 19К, этот антиген присутствует в цитоплазме и ядре инфицированных клеток (рис. 12.7) (Symington, Green, Brackman, Thornton, в
Рис. 12.7. Субклеточная локализация Т-антигена Е1В-19К Ad2 в цитоплазме и ядре человеческих клеток КВ на ранней стадии заражения и демонстрация специфичности антител по результатам иммунофлуоресцеитиой микроскопии с применением антител к пептидам. Клетки фиксировали через. 8 ч после заражения н проводили непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание (Л) антителами к пептиду 7 (пептид из 16 аминокислот, соответствующий С-концевому сегменту Т-антигена Е1В-19К Ad2) и (Б) антителами к пептиду 7 после инкубации с пептидом 7. (Syminton, Green, Brackmann, Thornton, в печати.)
