Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка):
El—Е7 представляют собой экзоны в генах белков; однако пока эти белки не идентифицированы ни в одной папилломавирусной природной или экспериментальной системе. Предполагаемые поздние белки L1 и L2 — это, по-видимому, два капсндных белка, обнаруженные в вирионах HPV-la и BPV-1.
Геномы HPV-la и BPV-1 имеют несколько специфических гомологичных участков; это показывает нуклеотидная последовательность вирусной ДНК и аминокислотная последовательность вирусных белков, которые должна кодировать эта ДНК [49]. Напротив, между ДНК папилломавирусов BPV-1, HPV-la и HPV-6b и ДНК полиомавирусов SV40 и Ру не обнаружено заметной гомологии. Отсутствие гомологии и различие в стратегии экспрессии вирусных генов еще раз подтверждают, что полиома- и папилломавирусы составляют два разных семейства.
Аденовирусы ^
Аденовирусы человека — это одна из лучших экспериментальных систем для изучения молекулярной биологии клеток человека и молекулярных основ клеточной трансформации [94]. В этом разделе мы рассмотрим современные представления об организации и экспрессии генома Ad2, а затем более подробно— молекулярно-биологические аспекты трансформации клеток, индуцируемой аденовирусами [89, 218].
Организация генома аденовирусов
Аденовирус 2 человека (Ad2) и родственный ему аденовирус 5 (Ad5) — это наиболее изученные аденовирусы человека; о них, в основном, и пойдет речь в данном разделе. На рис. 12.4 показаны организация генома вируса Ad2 и локализация главных ранних и поздних мРНК и ранних белков. Вирусный геном длиной 36, kb разбит на 100 единиц. Во время ранних фаз продуктивной инфекции Ad2 транскрибируется шесть независимых областей вирусного генома. Это ранние области Е1А, Е1В, Е2 (Е2А и Е2В), ЕЗ, Е4 и поздняя область L1. Каждый из этих ранних транскрипционных элементов использует один промотор и дает сложный спектр сплайсированных мРНК-
Особенно интересны области Е1А (единицы карты 1,3—4,5) и Е1В (единицы карты 4,6—11,1), поскольку в них закодирована информация об инициации и поддержании трансформации, индуцируемой Ad2. Кроме того, Е1А кодирует регуляторные белки, которые активируют экспрессию других ранних генов Ad. В областях Е1А и Е1В закодировано от пяти до 11 белков (подробнее см. в работе [98]). При экспрессии двух наборов ¦вирусных генов Е2А и Е2В, которые кодируют какую-то из
Поздние лидерные участки
L1
L2
L3
L4 L5
х у z---------------
Е1А Е1В
41-52К 20К IX E3>C?S> О
35-47К 19К *¦ ЕЗ>С>^
Я K№frPT^
:д.карт.О
„ in IVag pi)
¦a lu<SSS5 ‘
"to3
es> gpZT
40
50
Ш. 70
f^jlo
„120 К
<SS33
рТР
EZB
'ис. 12.4. Структура генома Ad2 и соответствующие генные продукты. Черные стрелки — вирусные мРНК; они направлены к '-концу. Пунктирные линии — выщепляемые при сплайсинге интроны. Заштрихованные стрелки — .ранние белки. Соответст-ие известных ранних белков указанным участкам карты было проведено по оценкам их молекулярных весов. рТР — предшественник терминального белка 80К. (Из [98], с разрешения авторов.)
Трансформация и онкогенез: ДНК-содержащие вирусы 38
функций репликации вирусной ДНК, используется один и тот же ранний промотор, расположенный вблизи 75-й единицы карты. Область Е2А (единицы карты 66—61) кодирует полифунк-циональный ДНК-связывающий белок (73К). Соответствующий фосфопротеин удалось получить в высокоочищенном виде. Сегмент Е2В кодирует два белка. Один из них является предшественником (8GK) терминального белка (рТР; единицы карты 28,9—23,5), второй —ДНК-полимеразой (120 К; единицы карты 24,0—14,2). Эти два белка совместно выполняют функцию инициации репликации аденовирусной ДНК. При экспрессии ранней области ЕЗ (единицы карты 76—86) образуется семь видов мРНК. При этом используется один общий промотор, расположенный вблизи 76-й единицы. Пока известны только два кодируемых ЕЗ белка — гликопротеин 21К (связывающийся с клеточной мембраной) и белок 14К. Е4 (единицы карты 99,1—91,3) кодирует сложную группу из семи мРНК; при трансляции in vitro удалось обнаружить от шести до 16 различных белков Е4. Наконец, во время ранней фазы с области L1 под контролем позднего промотора транскрибируется специфический класс мРНК, который транслируется с образованием двух родственных друг другу белков с мол. массой 52К и 55К [170].
Переход к поздним стадиям экспрессии аденовирусных генов осуществляется при инициации репликации вирусной ДНК; в это время происходят основные изменения в картине транскрипции вирусных генов. Большинство поздних генов располагается в области от 16-й единицы карты, где локализован главный поздний промотор, до 92-й единицы (рис. 12.4). При процессинге из одной молекулы ядерной про-РНК получается 20 поздних мРНК, образующих пять семейств: от L1 до L5 (рис. 12.4). Эти мРНК содержат одинаковый лидерный участок, состоящий из трех частей, которые считываются с сегментов, расположенных вблизи единиц карты 16, 19 и 26. Во время поздних стадий в большом количестве продуцируются поздние мРНК и кодируемые ими вирусные (главным образом структурные) белки.
