Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Филдс Б.Н. -> "Вирусология: В 3-х т. Том 1 " -> 171

Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.

Филдс Б.Н., Найп Д.М., Мэрфи Ф.А., Харрисон С. Вирусология: В 3-х т. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 492 c.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка): virusologiyat11989.djvu
Предыдущая << 1 .. 165 166 167 168 169 170 < 171 > 172 173 174 175 176 177 .. 224 >> Следующая

Интересно также, что экспрессия гена Е1А приводила к активации транскрипции клеточных генов, в том числе хромосомного гена, кодирующего белок теплового шока 70К [203], и человеческого гена \'-глобина, введенного в культивируемые клетки человека с помбщью плазмиды [107, 287]. Клеточное фракционирование и иммунофлуоресцентная микроскопия с антителами против пептидов показали, что Т-антигены Е1А локализованы в клеточном ядре [67, 175, 243] и, по-видимому, связаны с ядер-ным матриксом [67]; это согласуется с предположением об их участии в процессе экспрессии генов. На рис. 12.6 представлены результаты иммунофлуоресцентной микроскопии клеток на ранней стадии заражения Ad 12; использовались антитела к С-концу Т-антигенов Е1А Ad 12. Четко видно специфическое окрашивание клеточного ядра.
Аденовирусная 13S-mPHK Е1А кодирует функцию, необходимую дпя клеточной трансформации, не совпадающую с функцией активации вирусных ранних генов
Как мы уже говорили, 13S-mPHK Е1А кодирует некую регуляторную функцию, которая приводит к активации экспрессии других ранних вирусных генов. В связи с этим важно выяснить, выполняет ли ген Е1А такую же функцию в процессе трансформации. В последних работах с использованием мутантов по генам Е1 получены убедительные данные, свидетельствующие о том, что а) можно разграничить функцию Е1А по активации ранних генов и его функцию в трансформации; б) 13S-MPHK Е1А кодирует специфическую функцию в процессе трансформации.
Мутант Ad5 /ir440 содержит нарушения в сайте 2,72 единицы карты области Е1, т. е. в пятом и шестом нуклеотидах, начиная с 5'-конца от места сплайсинга 12S-MPHK. Эта модификация приводит к дефекту в сплайсинге 12S-mPHK и к появлению в 13S-mPHK amber-кодона [267]. В результате мутант /гг440 дефектен по экспрессии 12S-mPHK Е1А, а кроме того, кодирует неполный полипептид, транслирующийся с мутантной 13S-mPHK-При этом мутант кг440 синтезирует нормальное количество мРНК Е1В и Е4 и продуцирует какое-то количество мРНК Е2 и ЕЗ. Тем не менее, несмотря на нормальный уровень экспрессии Е1В, hr440 не способен трансформировать клетки [267]. В другой работе показано, что трансфекция первичных клеток почек крысят и 3Y1 плазмидами, содержащими ген Е1В под контролем
Рис. 12.6. Субклеточная локализация Т-антигенов EiA Adl2 в ядре человеческих клеток КВ на ранней стадии заражения и демонстрация специфичности антител по результатам иммунофлуоресцентной микроскопии с применением антител к пептидам. Клетки фиксировали через 24 ч после заражения в присутствии цитозинарабинозида и проводили непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание (А) антителами к пептиду 204 (пептид из 16 аминокислот, соответствующий С-концевому сегменту Т-антигена Е1А Adl2) и (Б) антителами к пептиду 204 после инкубации с пептидом 204. (Из [175], с разрешения авто-ров.)
раннего промотора SV40, индуцирует экспрессию области Е1В, но не приводит к трансформации клеток [291]. В случае же ко-трансфекции с плазмидой, содержащей область Е1А, трансформация происходит. Все эти результаты свидетельствуют о том, что экспрессии Е1В недостаточно для трансформации; необходимо наличие не(кой другой, отличной от активации гена Е1В функции Е1А.
Указания на то, что для трансформации нужен продукт гена 13S-MPHK, получены в работах с использованием трех дефектных по функции трансформации мутантов El — hrl, m500 и pR7. Эти мутанты кодируют нормальные генные продукты 12S-MPHK, но неполные генные продукты 13S-MPHK. и индуцируют образование нормального количества мРНК Е1В. Мутант hrI имеет делецию размером в один нуклеотид в точке 2,93 единиц карты и это приводит к синтезу неполного Т-антигена, транслируемого с 13S-mPHK Е1А, и нормального Т-антигена, транслируемого с 12S-mPHK Е1А [234]. Мутант hrl при 37°С вызывает - полу-абортивную трансформацию первичных клеток почек крысят; клетки не могут расти в полужидкой среде и обладают слабой опухолеродностью при введении их мышам nude [90, 245]. В абортивно трансформированных культурах первичных клеток почек крысят происходит нормальная экспрессия Т-антигенов ElB 53К и 19К. Инсерционный мутант Ad5 m500 получен путем введения октануклеотида в сайт 2,85 единиц карты, т. е. в область Е1А, кодирующую 13S-mPHK. Этот мутант синтезирует модифицированную 13S-mPHK, с которой транслируется неполный Т-антиген с модифицированной С-концевой аминокислотной последовательностью, и обычную 12S-MPHK (октанукйеотидная вставка расположена в области интрона гена 12S-MPHK, которая удаляется при сплайсинге) [28]. Мутант т500 теряет способность к трансформации первичных клеток почек крысят, однако индуцирует нормальный синтез мРНК Е1В и ЕЗ, а кроме того, синтез какого-то количества мРНК Е2 и Е4 [28]. Плазмида pR7 содержит всю область El Ad 12 с делецией нуклеотида 1005 (2,9 единиц карты) [18]. Такая мутация приводит к сдвигу рамки в кодирующей области 13S-mPHK Е1А, с которой вследствие этого транслируется неполный Т-антиген, но не оказывает влияния на кодирующую область 12S-MPHK Е1А [18]. Плазмида pR7 не способна к трансформации первичных клеток почек крысят, но индуцирует экспрессию нормального количества мРНК Е1В. Результаты трех названных работ позволяют предположить, что за активацию вирусных ранних генов и индукцию трансформации клеток отвечают два разных белковых домена или два разных посттрансляционных продукта, кодируемые
Предыдущая << 1 .. 165 166 167 168 169 170 < 171 > 172 173 174 175 176 177 .. 224 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed