Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Филдс Б.Н. -> "Вирусология: В 3-х т. Том 1 " -> 174

Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.

Филдс Б.Н., Найп Д.М., Мэрфи Ф.А., Харрисон С. Вирусология: В 3-х т. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 492 c.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка): virusologiyat11989.djvu
Предыдущая << 1 .. 168 169 170 171 172 173 < 174 > 175 176 177 178 179 180 .. 224 >> Следующая

печати). По данным иммуноэлектронной микроскопии клеток, трансформированных Ad2, Т-антиген ' Е1В-19К локализован в цитоплазматических мембранных структурах на периферии ядра (P. Nakane, М. Green, в печати). О присутствии Т-антигена Е1В-19К в мембранной фракции свидетельствуют и биохимические данные [^15]. Таким образом, Т-антиген Е1В-19К, по-видимому, аналогичен среднему Т-антигену Ру, который обнаруживается и в мембранных структурах цитоплазмы, и в ядре [109]. Т-антиген Е1В-19К, очевидно, играет двоякую роль; кроме участия в трансформаЦи/ клеток и опухолеродностй, он защищает новосинтезированную вирусную ДНК и ДНК клетки-хозяина [272Ь].
Ясно, что для понимания механизма трансформации клеток, индуцируемого аденовирусами, необходимо детально исследовать функции Т-антигенов Е1А и Е1В. Т-антигены Е1А предоставляют нам уникальную возможность для изучения регуляции экспрессии генов у эукариот. Важным шагом в исследовании функций генов Е1 могли бы стать биологические и биохимические работы с очищенными Т-антигенами Е1. К сожалению, в инфицированных и трансформированных клетках этот белок присутствует в незначительных количествах. Для достижения дальнейшего прогресса в этой области необходимо получить Т-антигены в очищенном виде, а для этого необходимы такие эукариотические клетки, в которых они амплифицированы, или созданные с помощью генетической инженерии прокариотические клетки — сверхпродуценты Т-антигенов.
Герпесвирусы
О молекулярной биологии процесса трансформации клеток с помощью герпесвирусов известно сравнительно мало. Ни в одной работе не удалось показать, что какой-нибудь из герпесвирусов кодирует трансформирующий ген, функция которого нужна для поддержания трансформированного состояния. Возмож-но, механизм онкогенеза при участии герпесвирусов в корне отличается от механизма онкогенеза в случае SV40, Ру, Ad и тех ретровирусов, которые кодируют онкогены.
Трансформация с помощью апьфа-герпесвирусов HSV-1 и HSV-2
Способность специфических рестрикционных фрагментов ДНК HSV-1 и HSV-2 к трансформации in vitro была установлена несколькими исследователями (более подробно см. в работе [150]). Очаговая трансформация эмбриональных клеток хомячка в обедненной сывороткой среде в результате трансфекции фрагментом F Xbal (23 kb) HSV-1, локализованным в области 30— 45 единиц карты, была впервые описана Камачо и Спеар
0 10 20 30 40 50 60 70 80 30 100
L “ S
Bgl IH
HSV-11 ' ' Ш///Щ I
! 15,4 kb !i 1 I
И >
1 m*r'i !j i !
1 1
! ijB gt H/IHdoI-CD ! tBgl IHN
HSV-21 ! № i
ZZ.Zkb 7,5 kb
mtr-Ш mtr-ll
mi/Hindlll-NE Xbal-E
НСМУГ ШГ ........... ¦ ii:V::v-vaa~
Щь 14,3 кь
Рис. 12.8. Карта рестрикционных фрагментов ДНК HSV-1, HSV-2 и HCMV, обладающих трансформирующей активностью. (С изменениями из [116], с разрешения авторов; положения трансформирующих фрагментов HGMV взяты из работ [201, 37],)
[27]. Эти трансформированные клетки могли расти в полужидкой среде. Рейес и др. [233] трансформировали эмбриональные клетки хомячка и мыши Balb/ЗТЗ фрагментом I Bglll HSV-1 (15,4 kb), расположенным в области 31—42 единиц карты. Этот сегмент вирусного генома называют морфологической трансформирующей областью I (rntrl на рис. 12.8). Сегмент mtrl кодирует гликопротеин HSV-1 (gAgB) и ДНК-связывающий белок; здесь же находится и сайт инициации репликации ori вирусной ДНК. Однако попытки обнаружить последовательности вирусных ДНК в клетках, трансформированных фрагментами ДНК HSV-1, пока не увенчались успехом [233, 116].
Сообщалось, что в случае HSV-2 трансформировать клетки могут два разных рестрикционных фрагмента ДНК. Фрагмент N Bglll (7,5 kb), расположенный в области 58—63 единиц карты (mtrll на рис. 12.8), трансформирует эмбриональные клетки крыс и хомячков, а также клетки мышей Balb/ЗТЗ и NIH/3T3 [77, 233]. Трансформированные клетки были отобраны по способности расти в обедненной сывороткой и в полужидкой средах. Второй фрагмент ДНК HSV-2, фрагмент CD Bglll/Hp.al (22 kb), расположенный в области 42—57 единиц карты (mtrlll на рис. 12.8), трансформирует эмбриональные клетки хомячка. Это было установлено методом пассажей: клетки повторно культивировали, чтобы отобрать иммортализованные трансформанты [134]. Недавно фрагмент mtrlll удалось разделить на два функциональных субфрагмента, кодирующие две последовательные ступени трансформации, — иммортализацию и превращение им-мортализованных клеток в опухолеродные [135]. Ни один из трансформирующих фрагментов HSV-2 (mtrll, mtrlll) не гомо-
Предыдущая << 1 .. 168 169 170 171 172 173 < 174 > 175 176 177 178 179 180 .. 224 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed