Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Филдс Б.Н. -> "Вирусология: В 3-х т. Том 1 " -> 170

Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.

Филдс Б.Н., Найп Д.М., Мэрфи Ф.А., Харрисон С. Вирусология: В 3-х т. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 492 c.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка): virusologiyat11989.djvu
Предыдущая << 1 .. 164 165 166 167 168 169 < 170 > 171 172 173 174 175 176 .. 224 >> Следующая

биологические функции аденовирусных Т-антигенов Е1А: иммортализация и частичная трнсформация
Область Е1А кодирует белки, в функцию которых входит инициация трансформации, поддержание клеток в трансформированном состоянии и активация ранних вирусных генов. Фрагмент L Hpal Ad5 (единицы карты 0—4,5), который включает только область Е1А, может частично трансформировать первичные клетки почек крысят [122]. Эти трансформированные клетки иммортализованы и анэуплоидны, но по своей морфологии и ростовым свойствам сходны с нетрансформированными [122]. Сообщалось, что аналогичной способностью к частичной трансформации упомянутых клеток обладает и фрагмент Н Bgll1 Ad7 (группа В, единицы карты 0—4,5); биологические свойства частично трансформированных клеток пока охарактеризованы не полностью [54]. Фрагмент Н Accl (единицы карты 0—4,5; прежнее обозначение Bpal Н) Adl2 (группа А), несущий только область Е1А, частично трансформирует стабильную крысиную клеточную линию 3Y1; по своей опухолеродности, способности расти в обедненной сывороточной среде и делиться в полужидкой среде эти клетки относятся к промежуточному (между трансформированным и нетрансформированным) фенотипу [264]. Тот факт, что экспрессия Т-антигенов Е1А Adl2 может приводить к частичной трансформации стабильной линии клеток, позволяет предположить, что область Е1А кодирует не только функцию «иммортализации», но и функцию «трансформации»; в этом отношении Е1А отличается от гена Ру, который не оказывает никакого воздействия на стабильные линии клеток.
Опыты с использованием трех мутантов Ad, имеющих деле-ции в области Е1А, наводят на мысль, что функции «иммортализации» и «частичной трансформации» кодируют 2/з области Е1А (от N-конца). Мутант d/311 Ad5 может трансформировать первичные клетки эмбрионов крыс, хотя он имеет делецию из 58 пар оснований в области 3,56—3,76 единиц карты, в результате чего происходит преждевременная терминация синтеза обоих Т-антигенов Е1А [262]. Линия крысиных клеток 3Y1 может переходить в частично трансформированное состояние под действием мутанта d/313 Ad5, хотя у него отсутствует участок протяженностью 3,7—10,1 единиц карты, т. е. сохранена большая часть Е1А, но утрачена вся область Е1В [263]. Наконец, мутант Ad2 d/238, у которого на С-конце Е1А отсутствует последовательность, кодирующая 66 аминокислот, может трансформировать клетки 3Y1 так же эффективно, как и вирус дикого типа [156]. Таким образом, экспрессия 2/з области Е1А Ad (N-конце-вой части Т-антигенов) приводит к иммортализации первичных
фибробластов и частичной трансформации стабильной клеточной линии.
Ясно, что функции Е1А прямо или косвенно нужны для поддержания трансформации; на это указывают результаты опытов с использованием /ir-мутантов Ad5, имеющих нарушения в области Е1А, в результате которых эти мутанты становятся чувствительными к понижению температуры (cs-мутанты). Cs-му-танты могут трансформировать клетки при температуре 37—
38,5 °С, но не при температуре 32—32,5°; при этом клетки, трансформированные при пермиссивных температурах, утрачивают некоторые сопряженные с трансформацией свойства при понижении температуры до непермиссивных значений [8, 121]. Cs-фенотип /irl-мутантов зависит от клетки-хозяина. Первичные клетки почек крысят при пермиссивных температурах трансформируются полуабортивно [245], а первичные клетки эмбрионов крыс [121] и стабильная крысиная клеточная линия [8] — полностью. При низких непермиссивных температурах все три типа клеток оказываются резистентными по отношению к трансформации мутантами hrl. Результаты последних работ показывают, что чувствительной к понижению температуры является функция трансформации Т-антигена, кодируемого 12S-MPHK [193].
Биохимические функции аденовирусных Т-антигенов Е1А: ' активация ранних вирусных генов и активация и репрессия клеточных генов
При исследовании hr- и делеционных мутантов, дефектных по экспрессии Е1А, были получены чрезвычайно интересные данные относительно биохимических функций Т-антигенов Е1А. Исследование синтеза РНК в клетках, зараженных этими мутантами, позволило получить первые данные о том, что продукт гена Е1А активирует экспрессию других ранних вирусных генов — Е1В, Е2, ЕЗ и Е4 [10, 140]. Продукт гена Е1А, по-видимому, выполняет регуляторную функцию на уровне транскрипции [202], хотя результаты некоторых экспериментов говорят о том, что он может также участвовать в стабилизации ранних вирусных РНК [143, 216]. Функцию регуляции кодирует 13S-мРНК Е1А, поскольку мутант Ad2 pm975, синтезирующий дефектную 12S-MPHK, может активировать экспрессию вирусных ранних генов [194], a hrI, дефектный по 13S-mPHK, — нет [140, 234]. Мутанты с нарушениями в 13S-mPHK, как правило, дефектны по синтезу вирусной ДНК. Это обусловлено главным образом ограничением экспрессии ранних генов, продукты которых необходимы для репликации вирусной ДНК (например, генов Е2А и Е2В). Механизм действия регуляторного белка, кодируемого 13S-mPHK Е1А, неизвестен. Опыты с использованием
белковых ингибиторов [143, 202] позволяют предположить, что продукт гена Е1А блокирует некий клеточный репрессор, но прямые данные на этот счет отсутствуют. -
Предыдущая << 1 .. 164 165 166 167 168 169 < 170 > 171 172 173 174 175 176 .. 224 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed